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专利号: 2022101113603
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种L‑泛解酸内酯脱氢酶,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

2.一种L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体,所述突变体氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.编码权利要求1所述L‑泛解酸内酯脱氢酶的基因。

4.编码权利要求2所述L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体的基因。

5.权利要求1所述L‑泛解酸内酯脱氢酶或权利要求2所述L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体在生物催化制备D‑泛酸前体中间物酮泛解酸内酯中的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用为:以含所述L‑泛解酸内酯脱氢酶或突变体编码基因的工程菌株经过诱导表达后获得的湿菌体为催化剂,以L‑泛解酸内酯为底物,于磷酸缓冲液中,在28 32℃、100 200 rpm条件下进行反应,反应结束后反应液乙酸乙~ ~酯萃取,于有机相中获得所述酮泛解酸内酯。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于:以湿菌体重量计为5 10 g/L的磷酸缓冲溶~液,所述底物的初始浓度为100 1000 mM缓冲溶液。

~

8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含有所述L‑泛解酸内酯脱氢酶或突变体编码基因的工程菌接种至含终浓度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基,37 ℃,180 rpm下培养8h获得种子液,种子液再以体积浓度1%接种量接种至新鲜的含有终浓度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基中,于37 ℃,180 rpm下培养至菌体OD600达0.6~0.8,加入终浓度为0.1 mM的IPTG,28℃下诱导培养12h后,4℃、8000 rpm离心

10 min,弃去上清液,收集获得湿菌体。