1.一种胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白,其特征在于:所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白为牛乳铁蛋白肽和连接于所述牛乳铁蛋白肽N端的胶原蛋白肽,所述牛乳铁蛋白肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示,所述胶原蛋白肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;
所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.如权利要求1所述的胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因。
3.如权利要求2所述的胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因,其特征在于:所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
4.一种含如权利要求2所述的胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒。
5.如权利要求4所述的重组质粒,其特征在于:所述重组质粒的载体为pPIC9K质粒。
6.如权利要求5所述的重组质粒,其特征在于:所述重组质粒按如下方法构建:(1)将如SEQ ID NO:1所示的胶原蛋白肽基因和如SEQ ID NO:3所示的牛乳铁蛋白肽基因分别用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切法连接到pPIC9K质粒的多克隆位点上,分别得到pPIC9K‑COL质粒和pPIC9K‑LfcinB质粒;
(2)以步骤(1)制备的pPIC9K‑COL质粒为模板,用下列引物扩增出pPIC9K‑COL载体片段:COLZT‑F:TAATACGTAGAATTCCCTAGGGCGCOLZT‑R:TCCGTAGTAAGGGGCGAATCC
以步骤(1)制备的pPIC9K‑LfcinB质粒为模板,用下列引物扩增出LfcinB片段:LfcinBPD‑F:
GATTCGCCCCTTACTACGGATTTAAGTGTAGAAGATGGCAATGGALfcinBPD‑R:
CTAGGGAATTCTACGTATTAGAAAGCTCTTCTAACACAAGTAATAGATG(3)将步骤(2)所述的pPIC9K‑COL载体片段与LfcinB片段利用一步克隆试剂盒进行无缝连接,所得产物转入大肠杆菌DH5α感受态细胞后,在含氨苄青霉素和卡那霉素的平板上培养后,挑取阳性克隆子测序验证,得到含所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒的菌株,提取质粒,得到所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒。
7.一种含如权利要求4所述的重组质粒的菌株。
8.如权利要求7所述的菌株,其特征在于:所述菌株按如下方法获得:(1)将如SEQ ID NO:1所示的胶原蛋白肽基因和如SEQ ID NO:3所示的牛乳铁蛋白肽基因分别用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切法连接到pPIC9K质粒的多克隆位点上,分别得到pPIC9K‑COL质粒和pPIC9K‑LfcinB质粒;
(2)以步骤(1)制备的pPIC9K‑COL质粒为模板,用下列引物扩增出pPIC9K‑COL载体片段:COLZT‑F:TAATACGTAGAATTCCCTAGGGCGCOLZT‑R:TCCGTAGTAAGGGGCGAATCC
以步骤(1)制备的pPIC9K‑LfcinB质粒为模板,用下列引物扩增出LfcinB片段:LfcinBPD‑F:GATTCGCCCCTTACTACGGATTTAAGTGTAGAAGATGGCAATGGALfcinBPD‑R:CTAGGGAATTCTACGTATTAGAAAGCTCTTCTAACACAAGTAATAGATG(3)将步骤(2)所述的pPIC9K‑COL载体片段与LfcinB片段利用一步克隆试剂盒进行无缝连接,所得产物转入感受态细胞后,在含氨苄青霉素和卡那霉素的平板上培养后,挑取阳性克隆子测序验证,得到含所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒的菌株,提取质粒,得到所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒;
(4)将步骤(3)所述的胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒用限制性核酸内切酶SacⅠ线性化后通过电激法转入毕赤酵母菌株GS115的感受态细胞中,于含氨苄青霉素和卡那霉素的MD平板上取阳性转化子测序验证,得到所述含所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白的编码基因的重组质粒的菌株。
9.如权利要求7所述的菌株在表达权利要求1所述胶原蛋白肽‑牛乳铁蛋白肽融合蛋白中的应用。