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专利号: 2018102142611
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.适于家蚕丝腺表达的改造人乳铁蛋白基因,其特征在于:所述改造人乳铁蛋白基因如SEQ ID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述适于家蚕丝腺表达的改造人乳铁蛋白基因的表达载体。

3.根据权利要求2所述的表达载体,其特征在于:所述表达载体含有顺序连接的增强子hr3,分泌型丝胶1基因启动子、改造人乳铁蛋白基因和丝胶1基因的终止子。

4.根据权利要求2所述的表达载体,其特征在于:所述表达载体还含有荧光筛选标记基因表达框,所述荧光筛选标记基因表达框位于所述增强子hr3上游。

5.权利要求3或4所述表达载体在家蚕丝腺中表达重组人乳铁蛋白中的应用。

6.利用权利要求3或4所述表达载体在家蚕丝腺中表达重组人乳铁蛋白的方法,其特征在于,包括如下步骤:将所述表达载体转化解除滞育家蚕蚕卵,用无毒胶水封口后经甲醛蒸汽消毒,孵化,筛选转基因阳性蛾圈,取阳性转基因家蚕茧壳,在液氮中粉碎成粉末,然后溶解于含50mM Tris-Cl、8M Urea、pH 8.0的缓冲液中,80℃水浴40min,离心收集上清,经纯化,得重组人乳铁蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:茧壳粉末溶解于缓冲液中茧壳粉末的浓度为20mg/mL。

8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述纯化的具体方法为:将上清液过His TrapTM FF crude亲和层析柱,用咪唑浓度为0 500mM的咪唑洗脱液洗脱,咪唑洗脱液用~pH7.0-7.5、浓度为8M Urea溶液配制,收集洗脱液,洗脱液即为纯化后的重组人乳铁蛋白。