1.过表达谷胱甘肽过氧化物酶基因GpxA在提高虫草素产量中的应用,其特征在于,过表达的谷胱甘肽过氧化物酶基因GpxA来源于蛹虫草菌或其他生物体的谷胱甘肽过氧化物酶编码基因,其具有如SEQ ID NO.3所示序列。
2.一种过表达谷胱甘肽过氧化物酶基因提高虫草素产量的方法,其特征在于:通过基因工程的手段将目的基因GpxA导入蛹虫草菌中构建GpxA基因过表达的蛹虫草重组菌株。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,运用根癌农杆菌介导的蛹虫草菌转化技术将过表达GpxA基因的重组载体导入蛹虫草菌中,构建蛹虫草重组菌株。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,构建流程如下:S1.将目的基因GpxA与线性化载体pDHt‑SK‑BenA连接后,转入大肠杆菌感受态细胞中,经PCR扩增、酶切、基因测序等验证筛选转化子,获得含重组载体pDHt‑SK‑BenA‑GpxA的大肠杆菌;
S2.液体培养S1得到的含重组载体pDHt‑SK‑BenA‑GpxA的大肠杆菌,提取质粒,将所述重组载体转入根癌农杆菌AGL‑1感受态细胞中,利用含50‑100μg/mL羧苄青霉素及50‑100μg/mL卡那霉素的YEB固体培养基进行培养并筛选转化子,经PCR扩增、酶切等验证后,获得含重组载体pDHt‑SK‑BenA‑GpxA的根癌农杆菌;
S3.将步骤S2得到的含重组载体pDHt‑SK‑BenA‑GpxA的根癌农杆菌在IM液体培养基中诱导培养后,与蛹虫草菌孢子悬液在IM固体培养基上共培养,同时覆盖含头孢噻肟和苯菌灵的M‑100固体培养基,筛选蛹虫草转化子并进一步在含头孢噻肟和苯菌灵的M‑100固体培养基上进行二次筛选,经PCR扩增、基因测序等验证,得到过表达谷胱甘肽过氧化物酶基因GpxA的蛹虫草重组菌株。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,目的基因GpxA为通过PCR技术以蛹虫草cDNA为模板扩增得到,PCR扩增所用引物对为GpxA‑F:ATGTCTTCTGCCGCGTCC;GpxA‑R:TCACTCGGCTTTTTTGTTAATCTCG。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,线性化载体为含有苯菌灵抗性基因BenA的表达载体pDHt‑SK‑BenA,BenA基因序列如SEQ ID NO.4所示。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,蛹虫草重组菌株是在合成培养基中开展液体深层发酵积累虫草素,所述合成培养基包括葡萄糖、无机盐、氨基酸和维生素B1;具体包括:20‑50g/L葡萄糖、5‑10g/L硫酸铵、0.5‑1g/L磷酸氢二钾、0.5‑1g/L磷酸二氢钾、0.5‑
10g/L硫酸镁、0.5‑15g/L硫酸锌、5‑10g/L甘氨酸、0.5‑1g/L天门冬氨酸、0.5‑2g/L谷氨酰胺、0.1‑0.5g/L酪氨酸、0.05‑0.2g/L半胱氨酸、0.5‑1g/L亮氨酸、0.5‑2g/L赖氨酸、0.05‑
0.5g/L苯丙氨酸、0.1‑1g/L维生素B1。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,合成培养基还包括1‑3g/L还原型谷胱甘肽。