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专利号: 2021116086252
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-09-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体的制备方法,包括:所述厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体采用薄膜分散法制备得到;薄膜分散法制备厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体中,含有薄膜的厚壳贻贝免疫活性六肽水溶液与含有吐温‑80的磷酸盐缓冲液混合,经旋转水合、过滤制成厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体;

所述薄膜的原料为卵磷脂、胆固醇,卵磷脂、胆固醇的质量比为4 6:1;

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含有吐温‑80的磷酸盐缓冲液中,吐温‑80加入量为磷酸盐缓冲液体积的0.6 0.8%;含~有吐温‑80的磷酸盐缓冲液与厚壳贻贝免疫活性六肽水溶液的体积比为1.4 1.6:1;

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所述厚壳贻贝免疫活性六肽的氨基酸序列为Leu‑Val‑Val‑Leu‑Gly‑His。

2.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体的制备方法,其特征在于:所述厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体的包封率≥68.3%。

3.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体的制备方法,其特征在于:所述厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体的平均粒径为475 520nm。

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4.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝免疫活性六肽脂质体的制备方法,其特征在于:所述胆固醇由改性胆固醇替代;所述改性胆固醇为壳寡糖衍生物‑胆固醇接枝物;

所述壳寡糖衍生物的制备包括如下步骤:取壳寡糖,冰浴条件下加入甲烷磺酸溶解,浓度为0.8 1.5g/mL;反应30 60min后得到带保护的壳寡糖;

~ ~

取金盏花苷E,按照固液比0.2~0.3g:1mL的比例加入SOCl2,55~70℃下反应5~8h,整个反应过程中严格控制干燥条件;反应结束后冷却至室温,旋蒸除去未反应的SOCl2,然后加入少量无水甲苯继续旋蒸,并重复操作2 3次,得到酰氯化金盏花苷E;

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取酰氯化金盏花苷E,缓慢滴加带保护的壳寡糖,置于室温下反应4 6h,然后置于‑15 ‑~ ~

20℃下过夜,之后加入到过量丙酮中,得到大量沉淀,离心,沉淀用丙酮沉淀3 5次得到带保~护的壳寡糖衍生物;

取带保护的壳寡糖衍生物,加入去离子水使其完全溶解,然后用氨水调节pH至8.0~

8.5,析出褐色沉淀,离心,沉淀用丙酮洗涤3 5遍,然后再用无水乙醇索氏抽提48 52h,真空~ ~干燥得到壳寡糖衍生物;

带保护的壳寡糖与酰氯化金盏花苷E的体积比为1:0.3 0.5;

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所述壳寡糖衍生物‑胆固醇接枝物的制备包括如下步骤:取胆固醇、EDC、NHS混合,加入适量DMSO溶解,置于50 60℃加热反应1.5 2h;然后缓慢滴入溶解于DMSO中的壳寡糖衍生~ ~物,继续搅拌反应48 54h;之后将反应液移至透析袋装中进行透析,每隔6 8h换一次水,透~ ~析54 72h;取透析后的上清液冻干得到壳寡糖衍生物‑胆固醇接枝物;

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胆固醇、EDC、NHS的质量比为1:1.9 2.1:0.8 1;壳寡糖衍生物与胆固醇的质量比为10~ ~ ~

15:1。