1.一种纳豆激酶的分离纯化方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：

（1）纳豆基质：将大豆用清水清洗，室温浸泡后，控干水分，获得预处理后的大豆；将预处理后的大豆与NaCl和蔗糖混合后灭菌，即为纳豆基质，40‑60℃保温；所述NaCl用量以预处理后的大豆质量计为2‑4g/100g；所述蔗糖用量以预处理后的大豆质量计为2‑5g/100g；

（2）纳豆发酵：将蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）CGMCC No.12336经扩大培养的种子液接种至步骤（1）制备的40‑60℃的纳豆基质中，30‑40℃恒温发酵培养30‑40h，发酵物于4℃放置8‑12h后，获得纳豆发酵产物；

（3）纳豆激酶粗品：将步骤（2）纳豆发酵产物冻干并粉碎，获得纳豆冻干粉；将纳豆冻干粉和生理盐水混匀，4 ℃放置过夜，离心，弃去沉淀，上清液抽滤，滤液即为纳豆激酶提取液，冻干后，得纳豆激酶粗品；

（4）阴离子交换柱层析：将步骤（3）纳豆激酶粗品用缓冲液溶解后过滤，滤液作为上样液进行阴离子交换柱层析；所述阴离子交换柱层析采用DEAE‑Sephadex A‑50阴离子交换层析树脂为层析介质；上样结束后，先以0.1M、pH7.4的磷酸缓冲液进行洗脱，洗脱速度10 s/滴，采用色谱工作站监测流出液，0‑62.4min未出峰处流出液按10min/管收集，然后分别收集62.5‑66.7 min、66.8‑68.3 min、68.4‑69min出峰处的流出液，接着按10min/管收集流出液，继续洗脱至95min不再出峰；合并66.8‑69min流出液，即为含有纳豆激酶蛋白和酶活的流出液，超滤，滤液冻干，即为纳豆激酶纯酶；阴离子交换层析柱中层析介质预处理方法为：将层析介质DEAE‑Sephadex A‑50搅拌均匀后浸泡于纯水中1h，倒去上层漂浮颗粒；先用

0.5M NaOH水溶液浸泡，摇匀，室温静置0.5 h，双层滤纸的布氏漏斗抽滤，并反复抽洗至pH在7.0；然后以0.5M HCl水溶液浸泡，摇匀，室温静置0.5 h，用双层滤纸的布氏漏斗抽滤，并反复抽洗至pH在7.0；再以0.5M NaOH水溶液再重复处理一次，最后将处理后的层析介质浸泡在0.1M pH7.4 磷酸缓冲液，即为预处理后的阴离子交换层析介质；所述浸泡用纯水体积用量以层析介质质量计为100mL/g；所述每次浸泡用NaOH水溶液和HCl水溶液体积用量以层析介质质量计均为15mL/g。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（2）种子液体积接种量以纳豆基质重量计为0.02‑0.05mL/g。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（2）种子液按如下方法制备：从蜡样芽孢杆菌CGMCC No 12336斜面中挑取一环到种子培养液中，在37 ℃、180 rpm下震荡培养16 h，获得种子液；所述种子培养液质量配方为：蛋白胨1.5%、氯化钠1%、酵母粉0.5%，溶剂为水，pH7.0。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（3）纳豆冻干粉是指将纳豆发酵产物倒入平板中于‑20 ℃预冻6 h后，用冻干机在‑53 ℃真空冷冻干燥过夜，后使用粉碎机打碎成粉。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（3）生理盐水体积用量以纳豆冻干粉质量计为10‑20mL/g。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（4）所述上样液是将纳豆激酶粗品用 

0.1M、pH7.4的磷酸缓冲液溶解后用0.45μm水系滤头过滤，取滤液即为上样液；所述磷酸缓冲液体积用量以纳豆激酶粗品质量计为10‑30mL/g。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（4）上样液上样速度为10 s/滴，上样量为

0.02‑0.06个柱体积。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（4）所述超滤是用超滤管在4 ℃、3000~

5000 g下离心30 min，超滤管截留分子量为10000MW。