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专利号: 2021114962134
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种酰胺酶突变体,所述酰胺酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第154位丙氨酸替换为天冬酰胺、苯丙氨酸或谷氨酸获得的。

2.一种权利要求1所述酰胺酶突变体的编码基因。

3.一种权利要求2所述编码基因构建的重组载体。

4.一种权利要求3所述重组载体转化制备的重组基因工程菌。

5.一种权利要求1所述酰胺酶突变体在拆分2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺制备(S)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺中的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述的应用为:以酰胺酶突变体工程菌经发酵培养获得的湿菌体或者湿菌体破碎后提取的酶作为催化剂,以2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺为底物,以pH为7.5 8.5的缓冲液为反应介质构成转化体系,在30 50 ℃、150 500 r/min条件~ ~ ~下进行转化反应,反应结束后,取反应液分离纯化,获得(S)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述转化体系中,底物的初始浓度为10 50 ~mM,催化剂的用量以菌体细胞干重计为0.25 0.75 g/L。

~

8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将酰胺酶突变体工程菌接种到含有终浓度50 mg/L卡那霉素的LB培养基中,37 ℃、150 r/min培养12 h,随后以体积浓度1%接种量转接到新鲜的含终浓度50 mg/L卡那霉素的LB培养基中,37 ℃、150 r/min培养至菌体浓度OD600为0.4~0.8,再向培养基中加入终浓度为0.1~1.0 mM的IPTG,28 ℃、150 r/min诱导培养12 h,取培养物离心,收集沉淀即获得湿菌体。