1.一种草铵膦脱氢酶突变体,其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.权利要求1所述草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。
3.如权利要求2所述的编码基因,其特征在于所述编码基因核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.一种高产NADPH依赖型草铵膦脱氢酶的基因工程菌,其特征在于:所述基因工程菌是以E.coli BL21(DE3)为宿主,表达SEQ ID No.1所示草铵膦脱氢酶突变体和SEQ ID No.3所示葡萄糖脱氢酶获得。
5.构建权利要求4所述基因工程菌的方法,所述方法包括:将序列如SEQ ID No.2所示的草铵膦脱氢酶突变体编码基因连接至表达载体pETDuet‑1的MCSⅠ上,将核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的葡萄糖脱氢酶编码基因连接至表达载体pETDuet‑1的MCSⅡ上,然后再转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中,筛选正确的转化子,得到基因工程菌E.coli BL21(DE3)‑pETDuet‑1‑PPTGDHE3‑GDH,即所述高产NADPH依赖型草铵膦脱氢酶的基因工程菌。
6.权利要求4所述基因工程菌在微生物催化PPO制备L‑草铵膦中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述应用为:向含有PPO、硫酸铵和葡萄糖的混合液中加入所述基因工程菌经发酵获得的酶液或湿菌体细胞,混合液在30~35℃下反应3~6h,得到L‑草铵膦。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述湿菌体细胞经全细胞固定化之后用于反应,所述全细胞固定化方法如下:
(1)向含谷氨酸脱氢酶的大肠杆菌菌体中加入磷酸缓冲液,制成50~200g/L的菌悬液,然后加入载体,充分搅拌20~30min,得混合液;
(2)向步骤(1)混合液加入聚乙烯亚胺,充分搅拌20~30min,得混合液;
(3)向步骤(2)混合液中加入葡聚糖多醛,充分搅拌20~30min,得混合液;
(4)步骤(3)混合液减压抽滤,取滤饼水洗,得到含谷氨酸脱氢酶的固定化全细胞。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述载体为活性炭、硅藻土、膨润土或蒙脱土,质量用量为菌体质量的5~15%。
10.如权利要求8所述的应用,其特征在于步骤(2)所用聚乙烯亚胺分子量为600~
70000,质量用量为菌体质量的1~10%。