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专利号: 2021114012061
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种农杆菌转化裂殖壶菌的方法,其特征在于,使用农杆菌将外源基因转化进入裂殖壶菌体内,使裂殖壶菌获得导入的外源基因的功能;

所述外源基因表达盒的启动子为裂殖壶菌的内源性启动子P2845,如序列SEQ ID NO.2所示;所述外源基因表达盒的终止子为裂殖壶菌的内源性终止子T2845,如序列SEQ ID NO.4所示;

所述农杆菌原始菌株为AGL‑1;所述裂殖壶菌菌株为HX‑308。

2.根据权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法,其特征在于,所述外源基因为G418抗性基因,如序列SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法,其特征在于, G418抗性基因NeoR表达盒,如序列SEQ ID NO.1所示。

4.一种农杆菌转化裂殖壶菌的方法,其特征在于,所述农杆菌转化裂殖壶菌的方法具体包括如下步骤:(1)重组质粒pZPK‑P2845‑NeoR‑T2845的构建:以pZPK为骨架,插入了裂殖壶菌HX‑308的启动子P2845和终止子T2845,在启动子和终止子中间插入G418抗性基因NeoR,得到重组质粒pZPK‑P2845‑NeoR‑T2845;

(2)农杆菌AGL‑1待转化菌株的构建:

将重组质粒pZPK‑P2845‑NeoR‑T2845转化进入农杆菌体内,挑选出阳性单克隆,接种于液体培养基活化,活化完成后取农杆菌接种于含有乙酰丁香酮的液体培养基进行诱导;

(3)裂殖壶菌HX‑308感受态的制备:

裂殖壶菌活化,挑取单克隆接种于液体培养基过夜活化,吸取活化菌液接种于新的液体培养基再次活化;

(4)农杆菌AGL‑1和裂殖壶菌HX‑308共培养:将诱导后的农杆菌和活化好的裂殖壶菌,涂布于含有乙酰丁香酮的诱导固体培养基进行共培养;

(5)裂殖壶菌转化子的筛选:

将共培养菌体冲洗下来,涂布于含有头孢噻肟钠和G418的固体培养基进行筛选,得到转化后的裂殖壶菌;

其中,启动子P2845如序列SEQ ID NO.2所示;终止子T2845如序列SEQ ID NO.4所示;

G418抗性基因NeoR如序列SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求4所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法,其特征在于,所述步骤(4)中共培养时间≥24 h,温度为28‑30℃。

6.根据权利要求4所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法,其特征在于,所述步骤(5)中培养条件为28‑30℃,培养时间为3‑7天。

7.一种权利要求1所述的农杆菌转化裂殖壶菌的方法在裂殖壶菌的DNA转化和代谢工程改造中的应用。