1.米根霉(Rhizopus oryzae)JYH‑4‑23,保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号:GDMCC No:61966,保藏日期2021年9月29日,地址:广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼;邮编510070。
2.一种权利要求1所述米根霉JYH‑4‑23在金银花绿原酸提取中的应用,其特征在于所述应用的方法为:将米根霉JYH‑4‑23经发酵培养的发酵液过滤,获得的滤液即为粗酶液;再将粗酶液与金银花混合,于30–35℃条件酶解10–14h,过滤,得酶解后的金银花粉滤饼;滤饼中加入乙醇水溶液浸提后,再进行超声提取,抽滤,滤液浓缩,获得金银花的醇提浓缩物,真空干燥,获得绿原酸。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述粗酶液体积用量以金银花质量计为3–
4mL/g,所述金银花在加入前需在85℃干燥并粉碎过40目筛。
4.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述粗酶液制备方法为:将米根霉JYH‑4‑23接种于产酶培养基中,于28–30℃、200–250r/min恒温振荡条件下培养36–48h,发酵液过滤,收集滤液即为粗酶液;所述产酶培养基终浓度组成为:麸皮15–20g/L,(NH4)2SO43–4g/L,KH2PO4
2–5g/L,MgSO4 0.5–1.0g/L,CaCl2 0.2–0.5g/L,溶剂为自来水,pH 6.0–6.5。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述产酶培养基组成为:麸皮20g/L,(NH4)2SO4
4g/L,KH2PO4 2g/L,MgSO4 0.5g/L,CaCl2 0.2g/L,溶剂为自来水,pH 6.0。
6.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述米根霉JYH‑4‑23在发酵前,先经平板培养基活化培养制备孢子液,或经种子培养基扩大培养制备种子液,然后将孢子液或种子液以体积浓度2%–5%的量接入产酶培养基进行产酶培养,所述方法为:(1)活化培养:将米根霉JYH‑4‑23接种于PDA平板培养基,于28–30℃恒温培养48–60h,获得平板培养物;平板培养物中加入无菌生理盐水,用接种环搅动使孢子悬浮,获得米根霉JYH‑4‑23孢子液;所述PDA平板培养基终浓度组成为:马铃薯200g/L,蔗糖20g/L,琼脂20g/L,溶剂为自来水,pH自然;
(2)种子扩大培养:步骤(1)活化培养后的米根霉JYH‑4‑23孢子液按体积浓度2%–5%的接种量接种至种子培养基中,于28–30℃、200–250r/min恒温振荡条件下培养30–36h,得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:蔗糖10–15g/L,酵母浸粉3–5g/L,KH2PO4 2–3g/L,MgSO4 0.3–0.5g/L,CaCl2 0.1–0.2g/L,溶剂为自来水,pH 6.0‑6.5。
7.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述乙醇水溶液浸提是指将所述的酶解后的金银花滤饼,加入体积浓度70%–80%乙醇水溶液中,搅拌均匀后置于50–60℃水浴中浸提
1–2h;所述乙醇水溶液用量以金银花粉质量计为10–15mL/g。
8.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述超声提取是指乙醇水溶液浸提后转入60℃的超声波清洗机中,功率100–200W超声提取30–60min。
9.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述金银花的醇提浓缩物的制备方法为:将所述的酶解后的金银花滤饼,加入体积浓度70%–80%乙醇水溶液中,搅拌均匀后置于50–60℃水浴中浸提1–2h,再转入60℃的超声波清洗机中,功率100–200W超声提取30–60min;超声醇提结束后,趁热抽滤,将滤液45℃减压浓缩至原体积的1/20–1/15,获得浓缩物;所述乙醇水溶液用量以金银花粉质量计为10–15mL/g。
10.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述真空干燥条件为:50℃、–0.1MPa条件下真空干燥至恒重。