利索能及
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专利号: 2021112925963
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,其特征在于:具体步骤如下:(1)选取两组母鼠进行对照实验,分别标记为空白对照组和LPS剂量组;

(2)对所述空白组母鼠采用生理盐水对同一乳腺位置乳导管进行分阶段连续灌注,对所述LPS剂量组母鼠采用等量的LPS对同一乳腺位置乳导管进行分阶段连续灌注,每次灌注的LPS为50μL,浓度为0.075‑0.15mg/kg,完成诱导过程;

(3)诱导完成后,处死小鼠,选取灌注部位的乳腺组织分别进行病理切片染色以及RNA和蛋白的提取。

2.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,所述母鼠选用分娩8‑10天的BALB/C母鼠。

3.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,每次灌注的LPS浓度为0.1 mg/kg。

4.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,灌注部位为第四对左右两侧乳导管。

5.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,所述空白对照组和LPS剂量组分别设置有至少两只母鼠。

6.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,所述空白对照组和LPS剂量组内的母鼠分别于进组的第0、3、6、9、12天分阶段连续灌注对应试剂,在第21天完成诱导并处死小鼠。

7.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,所述病理切片染色包括如下步骤:(1)取小鼠灌注的乳腺组织用10%中性福尔马林溶液固定,固定48h后将乳腺组织修成 3

1×2×3 cm小块置于包埋盒中,更换新的福尔马林溶液进行二次固定;

(2)流水冲洗组织块过夜后脱水、浸蜡、包埋,以3 5μm于切片机进行组织切片,42℃展~片机中充分展片,载玻片捞起组织切片,于烤片机上40℃烤片 2 4h;将玻片转置染色架进~行伊红‑苏木素染色和Masson染色,稍微晾干封片,吹风机吹干后,显微镜观察并拍照记录。

8.根据权利要求1所述的LPS诱导乳腺纤维化的小鼠模型的构建方法,所述RNA和蛋白的提取包括如下步骤:(1)从乳腺组织提取总RNA进行cDNA合成,并检测乳腺组织中Collagen I和CollagenⅢ mRNA表达;

(2)将乳腺组织匀浆冰浴30 min,离心15 min提取蛋白,加入上样缓冲液后100℃变性

15 min,将蛋白经SDS‑PAGE电泳后转膜,5%脱脂奶粉室温封闭2h后,TBST漂洗3次后,加入兔抗波形蛋白一抗在4℃环境下孵育过夜,然后TBST再漂洗3次后,加入HRP标记的羊抗兔二抗,在室温下孵育2 h,最后,用TBST 漂洗3次后加入 ECL发光液,暗室曝光。