1.一种基于特异性SNP变异的dCAPS标记,用于鉴定甘蓝型油菜角果长度,其特征在于,该标记基于BnaA09CRF6基因编码序列第319个碱基处的SNP位点,SNP为T或 G;BnaA09CRF6基因核苷酸序列如序列表Seq ID NO.1所示;包括一对引物:上游引物F:5’‑TCCTCCTCCTCCTCTTCGAGAAAAGCT ‑3’;
下游引物R:5’‑ CGAGACGACGGATCTCTGATCTCCCTCG‑3’。
2.一种利用权利要求1所述dCAPS标记鉴定甘蓝型油菜角果长度的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.1 选取待检测的一个或者多个甘蓝型油菜品种进行DNA提取;
S1.2 利用所述dCAPS标记进行PCR扩增,获得PCR产物;
S1.3 用限制性内切酶XhoI酶切上一步获得的PCR扩增产物,以创造酶切多态性;
S1.4 将S1.3酶切所得片段进行电泳检测,电泳结果在不同品种间呈现明显的高低条带;其中高带为PCR扩增产物经酶切后为单一的134bp片段,对应为短角果油菜品种;低带为PCR扩增产物经酶切后为单一的105bp片段,对应为长角果油菜品种。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,
所述PCR扩增具体操作如下:
PCR反应体系为:2×SanTaq PCR Mix 12.5μL,10μM正向引物和10μM各0.5μL,100 ng/μLDNA模板2μL,后续采用双蒸水补齐至25μL体系;
PCR反应程序:94℃预变性5min;94℃变性30s,68℃退火30s,72℃延伸20s,10个循环,每个循环退火温度下降1℃;然后94℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸20s,35个循环;72℃充分延伸10min;
所述酶切的具体操作如下:
酶切的反应体系为:10×FastDigest Buffer 2μL,第一PCR扩增产物10μL,XhoI限制性内切酶2μL,ddH2O补齐至20μL,37℃酶切反应2h,80℃热变性20min;
所述电泳检测条件为:
3.0%的琼脂糖凝胶;电泳电压130V;电泳时间50分钟。
4.一种利用权利要求1所述dCAPS标记辅助选择的甘蓝型油菜育种方法,其特征在于,在苗期对甘蓝型油菜材料进行基因型鉴定;利用所述dCAPS标记进行PCR扩增,获得PCR产物;用限制性内切酶XhoI酶切上一步获得的PCR扩增产物,以创造酶切多态性;将酶切所得片段进行电泳检测,电泳结果在不同品种间呈现明显的高低条带;其中高带为PCR扩增产物经酶切后为单一的134bp片段,对应为短角果油菜品种;低带为PCR扩增产物经酶切后为单一的105bp片段,对应为长角果油菜品种;选择长角果材料进行回交转育。