1.一种消除副产物两性霉素A且产两性霉素B的重组结节链霉菌，由如下方法构建获得：以结节链霉菌CCTCC NO：M 2017426为底盘菌，突变其聚酮合酶ER5结构域NADPH结合位点，所述聚酮合酶ER5结构域氨基酸序列如SEQ ID  NO.6所示，将其氨基酸序列中的HAGAGGVGMA突变为HAGASPVGMA，PGDAGRYGHEAAG突变为PGDDVGSFGSEAAG，再导入SEQ ID NO.1所示磷酸甘油酸变位酶基因（PGM）、SEQ ID NO.2所示丙酮酸脱氢酶基因（PDH）、SEQ ID NO.3所示6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因（6PGDH）、SEQ ID NO.4所示葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因（G6PD）、SEQ ID NO.5所示脂酰CoA合成酶基因（ACS）的串联基因获得。

2.如权利要求1所述的重组结节链霉菌，由如下方法构建获得：

（1）以结节链霉菌（Streptomyces nodosus ）CCTCC NO：M 2017426为底盘菌，将其聚酮合酶ER5结构域氨基酸序列中的HAGAGGVGMA突变为HAGASPVGMA，PGDAGRYGHEAAG突变为PGDDVGSFGSEAAG，得到结节链霉菌ZJB2016050‑ER5，所述聚酮合酶ER5结构域氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；

（2）将SEQ ID NO.1所示磷酸甘油酸变位酶基因、SEQ ID NO.2所示丙酮酸脱氢酶基因、SEQ ID NO. 3所示6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因、SEQ ID NO.4所示葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因、SEQ ID NO.5所示脂酰CoA合成酶基因串联，并导入结节链霉菌ZJB2016050‑ER5中，得到基因工程菌ZJB2016050‑ER5‑6PPGA，即所述消除副产物两性霉素A且产两性霉素B的重组结节链霉菌。

3.构建权利要求1所述重组结节链霉菌的方法，其特征在于所述方法如下：

（1）运用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，将底盘菌结节链霉菌（Streptomyces nodosus ）CCTCC NO：M 2017426基因组中聚酮合酶ER5结构域其中氨基酸序列由HAGAGGVGMA突变为HAGASPVGMA， PGDAGRYGHEAAG突变为PGDDVGSFGSEAAG，得到结节链霉菌ZJB2016050‑ER5；

（2）将PCR克隆获得的SEQ ID NO.5所示脂酰CoA合成酶基因（ACS）及启动子插入pJTU1278载体质粒多克隆位点处，得到重组载体pJTU1278‑eACS；

（3）将步骤（2）中得到的重组载体转化入大肠杆菌DH5α，对得到的转化子进行测序，将确认无误的载体导入供体菌大肠杆菌；

（4）在步骤（3）构建完成的质粒上依次插入SEQ ID NO.4所示葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因、SEQ ID NO.1所示磷酸甘油酸变位酶基因、SEQ ID NO.2所示丙酮酸脱氢酶基因、SEQ ID NO. 3所示6‑磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因，得到质粒pJTU1278‑e6PGDH‑ePDH‑ePGM‑eG6PD‑eACS（pJTU1278‑6PPGA），导入供体菌大肠杆菌；

（5）将步骤（4）构建的含有重组质粒pJTU1278‑6PPGA的供体菌株大肠杆菌通过接合转移方法将过表达载体转化到受体菌结节链霉菌ZJB2016050‑ER5，得到基因工程菌ZJB2016050‑ER5‑6PPGA，即所述消除副产物两性霉素A且产两性霉素B的重组结节链霉菌。

4.权利要求1所述重组结节链霉菌在微生物发酵制备两性霉素Ｂ中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述重组结节链霉菌接种至发酵培养基中，于25 30 ℃、100 300 rpm条件下进行发酵培养72 168h，发酵结束后取发酵液~ ~ ~上清分离纯化得到两性霉素Ｂ。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述发酵培养基组成如下：葡萄糖60 80 g/L，~

牛肉膏5~10 g/L，大豆蛋白粉5~10 g/L，棉子粉8~30 g/L，CaCO3 5~10 g/L，KH2PO4 0.1~0.4 g/L，溶剂为水，pH 7.0，119℃灭菌30 min。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述重组结节链霉菌先经种子培养，再将种子液以体积浓度2 10%的接种量接种至发酵培养基，所述种子培养过程如下：将所述重组结节~链霉菌接种在GYM平板上，26℃生长7天，获得灰色的孢子，使用棉花棒将表面孢子洗脱至无菌水中，将洗下的孢子悬液用含有棉花的注射器过滤，过滤后的孢子离心去上清，加入无菌水重悬，获得孢子悬液；孢子悬液接种至种子培养基26℃培养48h，获得种子液；所述GYM平板组成为：葡萄糖1 5 g/L，酵母粉1 5 g/L，麦芽提取物5 29 g/L，碳酸钙1 3 g/L，琼脂15~ ~ ~ ~ ~

20 g/L，溶剂为水，pH7.0 7.5，115℃灭菌30 min；所述种子液培养基组成为：蛋白胨10 20 ~ ~g/L，NaCl 5~10 g/L ，葡萄糖10~15 g/L，酵母粉5~10 g/L，CaCO3 0.5~1 g/L，溶剂为水，pH 

7.0 7.2，119℃灭菌30 min。

~