1.一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽，其特征在于：该抗冻多的分子量在1107.54～

1554.72Da，所含的三种主要多肽氨基酸序列分别是VGPAGPSGPSGPQ、RGSPGERGESGPAGPSG、VGPAGPSGPSGPQG。

2.根据权利要求1所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）采用草鱼鱼鳞为原料，先对草鱼鱼鳞进行处理；

（2）对处理后的草鱼鱼鳞进行酶解；

（3）分离纯化酶解液；

（4）冷冻干燥后得到所述的抗冻多肽；

（5）对抗冻多肽的抗冻活性进行测定，确定最佳酶解条件；

（6）测定抗冻多肽的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：步骤（1）的具体操作过程为：将草鱼鱼鳞清洗、晒干后进行粉碎，并进行45°C超声清洗50分钟；之后将洗净的鱼鳞过滤干净，使用1mol/L的柠檬酸溶液震荡浸泡24h，最后将鱼鳞过滤清洗至中性后备用。

4.根据权利要求3所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：步骤（2）的具体操作过程为：酶购自Sigma 生物试剂公司；采用单因素实验，对四个酶解因素进行考察，四个酶解因素分别为酶解温度：45℃、50℃、55℃、60℃和65℃，加酶量：2500 U/g、

3000 U/g、3500 U/g、4000 U/g和4500U/g，料液比：1：10、1：15、1：20，酶解pH：3、4、5、6和7；

称取3g在步骤（1）中处理后的草鱼鱼鳞溶解于60m1蒸馏水中，按照不同的酶与底物草鱼鱼鳞的比例加入相应量的酶，在一定的温度下水解一定的时间，反应结束后，沸水浴

10min灭酶，收集酶水解的溶液；在4℃、8000r/min条件下用冷冻离心机离心15min，取其上清液。

5.根据权利要求4所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：步骤（3）对上清液的酶解产物分离纯化的具体操作过程为：酶解产物首先选用凝胶色谱进行分离，第一次分离采用的洗脱液为pH7.0的PBS缓冲溶液，流速为0.8mL /min，洗脱峰在225nm下进行测量；收集具有最佳抗冻活性的峰，再用阳离子交换色谱进行分离，第二次分离采用的采用洗脱液为NaCl浓度为0‑0.5M的0.01mol/L pH5.0的醋酸‑醋酸钠缓冲溶液，流速为

0.5mL /min，收集具有最佳抗冻活性的峰，接着再用C18反相HPLC进一步分离，最后收集具有最佳抗冻活性的组分。

6.根据权利要求5所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽及其制备方法，其特征在于：步骤（5）具体过程为：

1）对酵母微生物低温保护效果测定

取1g活性干酵母放入离心管中，与10倍蒸馏水混合，在10℃下震荡20min，然后将抗冻多肽以两个水平0%和0.5%酵母悬浮液分别加入到离心管中震荡，制成酵母悬浮液，分别冻藏3d酵母悬浮液，对酵母菌落进行培养，计算出酵母的存活率；

细胞存活率=100%×（培养出细胞的数量/细胞总数） 2）热滞活性THA的测定

将冻干后的多肽样品配制成20mg/mL的水溶液；取5μL的多肽溶液密封于坩埚内，置于DSC炉体中测定抗冻多肽的THA；初始温度为20℃，以5℃/min的速率降温至‑20℃，保持2 min，再以相同的速率升温至20℃，保持2 min，根据熔融曲线计算多肽溶液的熔融焓Hm 和熔点Tm，然后，以5℃/min速率降温至‑20℃，保持2 min，再以1 ℃/min的速率缓慢升温至样品呈部分熔融状态，这一温度称为保留温度Th，在Th下保持2 min，最后以相同的速率降温至‑20℃；重复上述过程，选取不同的Th，分别按照公式(1)和(2)计算THA和冰晶含量Φ；THA=Th‑To （1）

φ（%）=（1‑(‑∆Hr)/∆Hm）×100 （2）式中，THA指热滞活性，℃；Th指保留温度，℃；T0指起始结晶温度，℃ ；Φ指冰晶含量，%；

∆Hr指结晶焓，J/g；∆Hm指熔融焓J/g。

7.根据权利要求6所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：步骤（6）的具体操作过程为：用LC‑MS/MS 进行检测步骤（5）分离出的具有较强抗冻活性的组分的其氨基酸序列。

8.根据权利要求6所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：步骤（5）通过对抗冻多肽的抗冻活性进行测定，确定最佳酶解条件；得到具有最大抗冻活性的酶解液的酶解条件是：酶采用碱性蛋白酶，酶解温度40‑60℃、酶解时间为3‑5h、酶‑底物草鱼鱼鳞配比为1：10‑1：20（w/w）、酶解pH为4‑6。

9.根据权利要求8所述的一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽的制备方法，其特征在于：最大抗冻活性的酶解液的酶解条件优选为：酶采用木瓜蛋白酶，底物草鱼鱼鳞浓度5%、pH6、酶解时间3h、酶解温度60°C、加酶量4000U/g。