1.一种具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,其包括采用碱提酸沉法在草菇中提取草菇蛋白,然后利用碱性蛋白酶酶解草菇蛋白获得草菇多肽,继而将得到的草菇多肽通过超滤法进行透析和进一步纯化处理后,完成草菇多肽的制备。
2.如权利要求1所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤:
(1)将草菇干品进行干燥处理后,磨成粉,制得草菇粉,然后将草菇粉溶于蒸馏水中制成草菇溶液,经超声破碎处理后,用预设浓度的NaOH溶液将草菇溶液的pH调至预设值,继而浸提处理预设时长后,再离心处理并取上清液,然后用预设浓度的HCL将上清液pH调制等电点,继而静沉处理,待沉淀析出后,再次离心处理,获得草菇蛋白质沉淀,将沉淀调至中性后进行冷冻干燥制得草菇蛋白粉;
(2)将草菇蛋白粉与蒸馏水按预设比例混合且加热溶解处理,再用预设浓度的NaOH溶液将草菇蛋白溶液pH调至预设值后,加入碱性蛋白酶酶解处理,继而在高温下灭活处理,再经离心处理后,取上清液,继而用预设浓度的HCL将上清液pH调至中性后,对产物冷冻干燥制得草菇多肽粉;
(3)设置过膜压力,料液温度和pH,在回流液流速为预设值时,通过超滤法透析分离出不同组分的体外抗氧化活性,然后将活性最高的组分冻干,制得草菇多肽冻干粉;
(4)采用Sephadex G‑25凝胶层析色谱进行第二次分离纯化;将经步骤(3)处理所得的草菇多肽冻干粉用超纯水配置成预设浓度的溶液,然后将葡聚糖凝胶充分溶胀后,缓慢匀速地注入层析柱中至距柱口处,使之不出现气泡,观察凝胶床的状态至光滑为止;其中,制备的溶液通过微滤膜过滤后,加入平衡后的层析柱中,再通过超纯水在预设流速下洗脱,并于预设检测波长下检测后,分管收集,并测其不同浓度的DPPH自由基清除能力,以实现进一步纯化处理,完成草菇多肽的制备。
3.如权利要求2所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)包括:
将草菇干品放入干燥箱中,60℃干燥至恒重,然后磨成粉,制得草菇粉,再将磨好的草菇粉溶于蒸馏水中,经超声破碎30min后,用0.1mol/L的NaOH溶液将草菇溶液pH调至10.0,再浸提处理1h,以6000r/min速率离心15min,继而取上清液,再用0.1mol/L的HCL将上清液pH调制等电点,然后静沉处理1h,待沉淀析出后,再次以6000r/min速率离心15min,得到草菇蛋白质沉淀,将草菇蛋白质沉淀调至中性后进行冷冻干燥制得草菇蛋白粉,置于干燥皿中保存。
4.如权利要求3所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,步骤(2)包括:
将草菇蛋白粉与蒸馏水以1:50的比例45℃加热溶解处理50min,用0.1mol/L的NaOH溶液将草菇蛋白溶液pH调至11后加入7000U/g碱性蛋白酶酶解2.5h,继而在95℃的高温下灭活20min,再以6000r/min速率离心20min,取上清液,再用0.1mol/L的HCL将上清液pH调至中性,冷冻干燥制得草菇多肽粉,置于干燥皿中保存。
5.如权利要求4所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)包括:
设置过膜压力为1.5~6bar,料液温度为15~45℃,pH为5.0~9.0,在回流液流速为4~
8LMH时,通过超滤法透析分离出不同组分的体外抗氧化活性,将活性最高的组分冻干,制得草菇多肽冻干粉。
6.如权利要求5所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,步骤(4)包括:
采用Sephadex G‑25凝胶层析色谱进行第二次分离纯化,将草菇多肽冻干粉用超纯水配置成浓度为50mg/mL的溶液,将葡聚糖凝胶充分溶胀后,缓慢匀速地注入层析柱中至距柱口处,使之不出现气泡,观察凝胶床的状态至光滑为止;其中,制备的溶液过0.22μm微滤膜,加入平衡后的层析柱中;再通过超纯水洗脱,其流速为1mL/min,最后置于波长254nm下检测,再分管收集,并测其不同浓度的DPPH自由基清除能力,实现进一步纯化处理,完成草菇多肽的制备。
7.如权利要求5所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,设置过膜压力为1.5bar,料液温度为25℃。
8.如权利要求5所述的具有抗氧化活性和保肝功效的草菇多肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,设置pH为7.0,回流液流速为6LMH。
9.一种草菇多肽,其特征在于,其由权利要求1至8之一所述的制备方法制得。
10.根据权利要求1至8之一所述制备方法制得的草菇多肽在抗氧化及保肝产品制备中的应用。