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专利号: 2021108469671
申请人: 新乡医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-08
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法,其特征在于,将小鼠耳朵间充质干细胞于DMEM培养基中培养至细胞长满后,使其接触抑制48h,然后更换培养基为分化培养基Ⅰ,48h后换为分化培养基Ⅱ,直至得到脂肪细胞;

所述分化培养基Ⅰ组成为:50mL 10%血清培养基+地塞米松50μL+IBMX50μL+100μL胰岛素+4‑6μL三碘甲状腺原氨酸;

所述分化培养基Ⅱ组成为:50mL 10%血清培养基+100μL胰岛素+4‑6μL三碘甲状腺原氨酸;

所述10%血清培养基组成为:45mL DMEM+5mL FBS+50μL庆大霉素。

2.根据权利要求1所述的一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法,其特征在于,培养条件为37℃,CO2体积分数5%。

3.根据权利要求2所述的一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法,其特征在于,所述小鼠间充质干细胞的获得包括以下步骤:S1、剪下4周龄小鼠的外耳,将外耳脱去毛发,使用PBS缓冲液洗涤2‑3次后置于胶原酶混合物中,并将外耳剪碎;

S2、将剪碎的外耳及胶原酶混合物于37℃下培养40‑60min,后用70μm滤网过滤,保留滤液;

S3、在滤液中加入等体积的含15%胎牛血清的DMEM培养基,离心,保留沉淀,用含15%胎牛血清的DMEM培养基将沉淀混成悬液,混匀,于37℃,CO2体积分数为5%的条件下培养,期间更换为含10%胎牛血清的DMEM培养基,培养5‑10天后,得到小鼠耳朵间充质干细胞。

4.根据权利要求3所述的一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法,其特征在于,S1中,所述小鼠为C57 WT小鼠。

5.根据权利要求4所述的一种体外诱导小鼠耳朵间充质干细胞分化为脂肪细胞的方法,其特征在于,S2中培养条件为:50rpm培养1h或水浴40min、且每隔5min吹打混匀一次。