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专利号: 2021108337085
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:无效专利
更新日期:2025-12-30
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器,其特征在于,包括赭曲霉毒素A的适配体Apt、DNAzyme发夹H、触发链T、连接探针LP、挂锁探针PP、PBS缓冲液、DNA

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聚合酶、Mg ,银簇链AgNC以及形成四面体的DNA链S1、S2、S3、S4和封闭链B;

所述赭曲霉毒素A的适配体Apt的序列为SEQ ID No:1;

所述DNAzyme发夹H的序列为SEQ ID No:2;

所述触发链T的序列为SEQ ID No:3;

所述连接探针LP的序列为SEQ ID No:4;

所述挂锁探针PP的序列为SEQ ID No:5;

所述银簇链AgNC的序列为SEQ ID No:6;

所述S1的序列为SEQ ID No:7;

所述S2的序列为SEQ ID No:8;

所述S3的序列为SEQ ID No:9;

所述S4的序列为SEQ ID No:10;

所述封闭链B的序列为SEQ ID No:11;

所述挂锁探针PP的5’ 端磷酸化处理;所述的S2、S3、S4链的3’ 端修饰有巯基‑SH,所述的目标物为赭曲霉毒素A。

2.根据权利要求1所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器,其特征在于,DNAzyme发夹H经过催化裂解释放触发链T,在电极上依次进行链置换暴露DNA四面体封闭链B、滚环扩增反应产生大量银簇链AgNC结合区域和银簇催化过氧化氢反应产生电化学信号。

3.权利要求1或2所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)环状模板CT的构建与银簇链AgNC的制备;所述环状模板CT通过挂锁式探针PP和连接探针LP在T4 DNA连接酶的辅助下杂交而成;所述银簇链AgNC通过AgNC核酸序列、AgNO3溶液通过NaBH4还原得到;

(2)对电极进行预处理;

(3)DNA四面体制备及其修饰到电极表面;

(4)均相反应产生电极反应的触发链T;

(5)电极上的链置换、环状模板CT的捕获及滚环扩增反应及其产物对银簇链的捕获。

4.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)的过程为:电极在氧化铝浆中进行抛光处理,直到呈镜面,用PBS和二次水反复冲洗;所述步骤(2)的电极为金电极。

5.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)的DNA四面体的制备过程为:将等摩尔量的DNA四面体五条链混合在TM缓冲液中,反应,备用。

6. 根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)的修饰到电极表面的过程为:将制备好的DNA四面体与三(2‑羧乙基)膦 TCEP注入电极,在室温下反应过夜。

7.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)均相反应的过程为:a.将赭曲霉毒素A的适配体和DNAzyme发夹H,灭菌,振荡,水浴锅中保持,形成H‑Apt探针后冷却至室温;

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b.取灭菌水,5×PBS缓冲液,步骤a的H‑Apt探针,Mg ,5 µL赭曲霉毒素A于灭菌的离心管中,振荡,孵育。

8. 根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)的过程为:取触发链T、DNA聚合酶反应缓冲液、10×RCA buffer、环状模板CT、dNTP以及银簇链AgNC,滴加到步骤(3)的电极上,然后将电极继续放在37℃的恒温箱中4 h,清洗。

9.权利要求3所述的制备方法制备的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器在检测食品、环境中赭曲霉毒素A上的应用。

10. 根据权利要求9所述的应用,其特征在于,以Ag/AgCl为参比电极,以Pt电极为对电极,电位设置为0到‑0.7 V,脉冲宽度0.05 V,扫描速率为0.05 s,采用差分脉冲伏安法读取电信号的变化,检测待测目标物。