1.一种检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器,其特征在于,在电极上依次修饰有ST-BK-S1层、aptamer-T-HP1-HP2-HP3-F层、血红素层;
所用到得碱基序列为:
aptamer碱基序列如SEQ No.1所示;具体为: GAT CGG GTG TGG GTG GCG TAA AGG GAG CAT CGG ACA;
T碱基序列如SEQ No.2所示;具体为: GTG CCC TGT CCG ATG CAA TGA CAC CCG ATC;
HP1碱基序列如SEQ No.3所示;具体为: GAT CGG GTG TCG TTG CAT CGG ACA GGG CAC CCG ATC CGA CCC GTG CCC TGA CCG CTG TAG CGA CGC GTT CAT;
HP2碱基序列如SEQ No.4所示;具体为: CTA CAG CGG TCG GGG TAC GGG TCG GAT CGG ATG CAA CGA TAC CCG ATC CGA CCC CTA GTC CGA CGC GTT CAT;
HP3碱基序列如SEQ No.5所示;具体为: AAC TAG GGG TCG GAT CGG GTG TCG TTG CAT GTG CCC TGT CCG ATG CAA CGA CAC CCG ATC CGA CGC GTT CAT;
F碱基序列如SEQ No.6所示;具体为: GTT CAT GAC TCT GAG GGT GGG;
BK碱基序列如SEQ No.7所示;具体为: TCA TGA CTC T;
S1碱基序列如SEQ No.8所示;具体为: GAG GGT GGG GAG GGT GGG GCC AA-SH(CH3)6;
ST碱基序列如SEQ No.9所示;具体为: ACC CTC CCC ACC CTC AGA GTC ATG AAC GCG TCG;
所述的S1链的3’端修饰有巯基-SH。
2.根据权利要求1所述的电化学生物传感器中,其特征在于,所述的ST-BK-S1层中ST、BK、S1的摩尔比为1:1:1;aptamer-T-HP1-HP2-HP3-F层中aptamer、T、HP1、HP2、HP3、F的摩尔比为1:1:5:5:5:25。
3.一种权利要求1和2中任一所述的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)对电极进行预处理;
(2)将ST-BK-S1层修饰到电极表面;
(3)将aptamer-T-HP1-HP2-HP3-F层修饰到电极表面;
(4)将血红素层修饰到电极表面。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)预处理过程为:电极在氧化铝浆中进行抛光处理,直到呈镜面,用PBS和二次水反复冲洗。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)将ST-BK-S1层修饰到电极表面的操作步骤如下:将ST、BK、S1在37℃中反应2 h,滴加10 μL到经过预处理的电极表面,在37℃下孵育2 h,清洗。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)将aptamer-T-HP1-HP2-HP3-F层修饰到电极表面的操作步骤如下:a.将aptamer和T加入灭菌的离心管中,振荡,放入95℃的水浴锅中保持,形成拱形探针后冷却至室温;
b.取灭菌水,5×PBS缓冲液,拱形探针,HP1、HP2、HP3,5 µL赭曲霉毒素A于灭菌的离心管中,振荡,放入37℃的水浴锅中孵育2 h;
c.将F链加入b步反应后的溶液,取10 μL滴加到预先修饰好的电极上,然后将电极继续放在37℃的恒温箱中2 h,清洗。
7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)将血红素层修饰到电极表面的操作步骤如下:将血红素滴加到步骤(3)反应完成的电极上,孵育,清洗。
8.根据权利要求1或4所述的制备方法,其特征在于,所述电极为金电极。
9.采用权利要求3的制备方法制备电化学生物传感器在检测食品、环境中赭曲霉毒素A上的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,具体方法为:以Ag/AgCl为参比电极,以Pt电极为对电极,电位设置为0到-0.7 V,脉冲宽度0.05 V,扫描速率为0.05 s,采用差分脉冲伏安法读取电信号的变化,检测待测目标物。