1.基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:所述工程菌是在kosakonia sp.菌株中敲除wcaj基因阻断GDP‑fucose流向岩藻多糖,同时异源表达幽门螺旋杆菌的岩藻糖基转移酶futC和过表达乳糖透过酶lacY使代谢流向2’‑岩藻糖基乳糖。
2.根据权利要求1所述基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:所述岩藻糖基转移酶futC的序列经密码子优化,其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第1171位至2073位所示。
3.根据权利要求2所述基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:所述岩藻糖基转移酶futC的5’端融合有麦芽糖结合蛋白MBP;所述麦芽糖结合蛋白MBP的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第1~1170位。
4.根据权利要求1所述基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:所述乳糖透过酶lacY的核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
5.根据权利要求1所述基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:所述敲除wcaj基因的方法是基于CRISPR‑Cas9的wcaj基因敲除。
6.根据权利要求5所述基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:基于CRISPR‑Cas9的wcaj基因敲除具体方法是将含Cas9基因的质粒以及质粒pCB003‑wcaj‑LRA转入kosakonia sp.菌中,所述pCB003‑wcaj‑LRA构建过程如下:分别以SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4为引物对扩增敲除所需的上下游同源臂,并将上下游同源臂以重叠PCR的方法进行连接得到片段记为wcaj‑LRA,以SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6为引物,pCB003为模板反向扩增获得pCB003‑wcaj‑N20,然后通过salⅠ和HindⅢ酶切位点将wcaj‑LRA片段连入pCB003‑wcaj‑N20,得到pCB003‑wcaj‑LRA。
7.根据权利要求1所述基于kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的重组菌,其特征在于:异源表达幽门螺旋杆菌的岩藻糖基转移酶futC和过表达乳糖透过酶lacY的方法,将含有岩藻糖基转移酶futC和乳糖透过酶lacY的表达载体转入kosakonia sp.菌中表达,所述表达载体构建过程如下:将SEQ ID NO.9所示序列通过NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点连入质粒pet28a‑tac,得到质粒pet28a‑tac‑MBPfutC;再将SEQ ID NO.10所示序列通过EcoRⅠ和SacⅠ酶切位点连入质粒pet28a‑tac‑MBPfutC,得到含有岩藻糖基转移酶futC和乳糖透过酶lacY的表达载体;所述pet28a‑tac质粒为pet28a质粒上T7启动子替换为Tac启动子。
8.利用kosakonia sp.菌株生产2’‑岩藻糖基乳糖的方法,其特征在于:通过将kosakonia sp.菌株中敲除wcaj基因阻断GDP‑fucose流向岩藻多糖,同时异源表达幽门螺旋杆菌的岩藻糖基转移酶futC和过表达乳糖透过酶lacY发酵合成2’‑岩藻糖基乳糖,所述岩藻糖基转移酶futC的序列经密码子优化,其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第1171位至2073位所示;所述乳糖透过酶lacY的核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述发酵条件如下:在发酵培养基中,通过3
流加甘油和乳糖,通气量1.5m /h,将溶氧控制在10%以上,发酵培养;所述发酵培养基各组分质量分数如下:4%甘油,0.8%胰蛋白胨,1.6%酵母浸粉,0.2%磷酸二氢钾,1.3%磷酸氢二钾。
10.权利要求1~7任一项所述重组菌在合成2’‑岩藻糖基乳糖中的应用。