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专利号: 2021103733589
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-01
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种1‑磺酸基‑异吲哚半抗原,其特征在于,其结构式如式(Ⅰ)所示:其中,R为—(CH2)n—,其中n=1~6。

2.如权利要求1所述的1‑磺酸基‑异吲哚半抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将邻苯二甲醛和亚硫酸钠与式(II)所示的氨基酸在室温条件下于弱酸性环境中进行反应后得到1‑磺酸基‑异吲哚半抗原;其中,H2N‑R‑COOH

式(II)

其中,R为—(CH2)n—,其中n=1~6。

3.根据权利要求2所述的1‑磺酸基‑异吲哚半抗原的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:将邻苯二甲醛溶于无水乙醇,无水亚硫酸钠溶于一级水,式(II)所示的氨基酸溶于一级水;将三份溶液依次加入到pH=6.6的磷酸二氢钠‑氢氧化钠缓冲溶液中,室温搅拌一段时间后,减压蒸馏除去反应液中的乙醇,冷冻干燥,即得1‑磺酸基‑异吲哚半抗原。

4.一种1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原,其特征在于,其结构式如式(III)所示:其中,R为—(CH2)n—,其中n=1~6;载体蛋白为牛血清白蛋白、乳铁蛋白或鸡卵清白蛋白。

5.权利要求4所述的1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤:

将权利要求1所述的1‑磺酸基‑异吲哚半抗原溶于MES水溶液中,加入EDC和NHS室温避光搅拌,反应结束后转移至冰浴,将载体蛋白溶解后加入,搅拌均匀,室温偶联过夜;偶联混合物低温下PBS透析数天,得到所述1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原;所述半抗原与载体蛋白的摩尔比为30~300:1。

6.根据权利要求5所述人工抗原的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:S11.将载体蛋白溶解于2~10mL的pH=9.6的CB缓冲液中;

S12.取7~37mg的1‑磺酸基‑异吲哚半抗原溶解于0.1M MES水溶液中;

S13.将7~37mg的EDC和5~23mg的NHS加入到S12的半抗原溶解液中,室温避光反应4h形成活泼酯;

S14.将活泼酯滴加到S11的载体蛋白溶液中,室温避光偶联过夜;

S15.反应完成后,将偶联混合物于4℃下,用PBS透析3天,得到1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原。

7.一种1‑磺酸基‑异吲哚抗体的制备方法,其特征在于,用权利要求5所述人工抗原免疫实验动物,使其机体产生特异地针对亚硫酸盐衍生物的抗体。

8.一种1‑磺酸基‑异吲哚抗体,其特征在于,其由权利要求7所述的制备方法制得。

9.权利要求4所述1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原或权利要求8的所述1‑磺酸基‑异吲哚抗体在间接检测亚硫酸盐中的应用。

10.一种间接检测亚硫酸盐的免疫分析方法,具体包括如下步骤:S31.将式(III)所示的1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原免疫动物制备亚硫酸盐的多克隆抗体,其中载体蛋白为乳铁蛋白;

S32.将式(III)所示的1‑磺酸基‑异吲哚人工抗原作为包被原包被在微孔板上,其中载体蛋白为鸡卵清白蛋白,然后将步骤S31制备得到亚硫酸盐的多克隆抗体加入微孔板中;

S33.加入衍生后的待测样品,采用竞争ELISA间接测定待测样品中亚硫酸盐的含量。