利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2021103499670
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-04
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种外切酶III驱动的三维DNA纳米机器,其包括信号探针@纳米金结构和检测探针;

信号探针中包含信号探针序列和荧光分子,检测探针中包含半胱天冬酶的识别位点和DNA触发链,DNA触发链与信号探针序列互补;

检测探针在半胱天冬酶存在下裂解释放出包含DNA触发链的结构,该结构中的DNA触发链与信号探针杂交形成双链DNA,双链DNA可被外切酶III识别并消化,释放出信号探针中的荧光分子,DNA触发链随即恢复单链并继续与其他信号探针杂交,以此实现外切酶III对纳米金表面信号探针的循环切割,从而循环释放出荧光分子。

2.根据权利要求1所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器,其特征在于,所述信号探针包括信号探针1和信号探针2,所述检测探针包含检测探针1和检测探针2;

其中,检测探针1中包含半胱天冬酶‑8的识别位点Ile‑Glu‑Thr‑Asp和DNA触发链1,检测探针2中包含半胱天冬酶‑9的识别位点Leu‑Glu‑His‑Asp和DNA触发链2;

DNA触发链1与信号探针1序列互补,DNA触发链2与信号探针2序列互补;

DNA触发链1和DNA触发链2的3’末端包含免于被外切酶III消化的保护序列区。

3.根据权利要求1或2所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器,其特征在于,所述荧光分子为Cy5分子和Texas Red分子,其分别被包含在信号探针1和信号探针2上。

4.权利要求1或2所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器,其特征在于,信号探针@纳米金结构由信号探针与纳米金溶液混合得到,信号探针通过Au‑S键连接在纳米金上;

检测探针可组装在由链霉亲和素包覆的磁珠上构成探针‑磁珠结构。

5.一种检测试剂盒,其包含权利要求1至4中任一项所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器和外切酶III。

6.权利要求1至4中任一项所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器或权利要求5所述的检测试剂盒在半胱天冬酶检测中的应用,优选可用于多种半胱天冬酶及其活性的同时检测。

7.权利要求1至4中任一项所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器或权利要求5所述的检测试剂盒在半胱天冬酶抑制剂筛选中的应用。

8.根据权利要求6或7所述的应用,其特征在于,所述半胱天冬酶为半胱天冬酶‑8和半胱天冬酶‑9。

9.一种检测半胱天冬酶及其活性的方法,其采用将权利要求1至4中任一项所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器或权利要求5所述的检测试剂盒;

优选地,所述方法包括:将检测探针置于检测样品中孵育,检测探针在半胱天冬酶存在下会发生裂解,将裂解产物置于含有外切酶III的体系中孵育,裂解产物优选经磁分离后取上清液置于含有外切酶III的体系中孵育,在该体系中,外切酶III驱动荧光分子的循环释放,检测荧光信号确认半胱天冬酶的存在;以及,可进一步地,对最终的反应产物进行单分子检测,定量荧光分子从而实现对半胱天冬酶的定量。

10.一种筛选半胱天冬酶抑制剂的方法,其采用将权利要求1至4中任一项所述的外切酶III驱动的三维DNA纳米机器或权利要求5中所述的检测试剂盒;

优选地,所述方法包括:将待筛选试剂置于已知半胱天冬酶活性的样品溶液中孵育,将检测探针置于该混合溶液中孵育,检测探针在半胱天冬酶存在下会发生裂解,将裂解产物置于含有外切酶III的体系中孵育,裂解产物优选经磁分离后取上清液置于含有外切酶III的体系中孵育,在该体系中,外切酶III驱动荧光分子的循环释放,对最终的反应产物进行单分子检测,定量荧光分子从而实现对半胱天冬酶的定量,根据半胱天冬酶的活性的降低程度实现对半胱天冬酶抑制剂的筛选。