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专利号: 2021101761654
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母工程菌敲除了C‑22甾醇去饱和酶Erg5,并且表达来源于Pangasianodonhypophthalmus的7‑脱氢胆固醇还原酶。

2.如权利要求1所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述7‑脱氢胆固醇还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。

3.如权利要求1或2所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母工程菌以酿酒酵母BY4742为宿主细胞。

4.如权利要求3所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母工程菌还包括启动子,所述启动子为强化7‑脱氢胆固醇还原酶的表达;所述启动子为PGK1p、GPM1p、TDH3p、TEF1p、TPI1p、GPD1p、TEF2p、ACT1p、GAL1p和TDH2p中的一种或多种。

5.权利要求1 4任一所述的酿酒酵母工程菌的构建方法,其特征在于,所述方法包括以~下步骤:

(1)表达盒的构建:将整合位点上游同源臂,酵母启动子,7‑脱氢胆固醇还原酶基因,酵母终止子,整合位点下游同源臂构建得到7‑脱氢胆固醇还原酶表达盒元件;将得到的7‑脱氢胆固醇还原酶表达盒元件以及含有Cas9蛋白的敲除质粒通过酵母转化的方式导入到酵母细胞体内,通过酵母自身的同源重组完成元件的组装进而得到完整的表达盒;

(2)将上述表达盒插入到酿酒酵母BY4742酵母染色体ChrXI上的1114a位点,并敲除C‑

22甾醇去饱和酶成功构建得到酿酒酵母工程菌。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述酵母启动子为PGK1p、GPM1p、TDH3p、TEF1p、TPI1p、GPD1p、TEF2p、ACT1p、GAL1p和TDH2p中的一种或多种。

7.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述酵母终止子为ADH1t。

8.一种生产菜油甾醇的方法,其特征在于,采用权利要求1 4任一所述的酿酒酵母工程~菌制备菜油甾醇。

9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,将酿酒酵母工程菌接种至种子培养基中,制备得到种子液;将种子液转接至发酵培养基中,收集培养后的细胞,加入皂化反应液,反应结束后加入正己烷萃取,制备得到菜油甾醇。

10.权利要求1 4任一所述的酿酒酵母工程菌在制备菜油甾醇及含有菜油甾醇的产品~中的应用。