1.一种酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母工程菌敲除了C‑22甾醇去饱和酶Erg5,并且表达来源于Pangasianodonhypophthalmus的7‑脱氢胆固醇还原酶。
2.如权利要求1所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述7‑脱氢胆固醇还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。
3.如权利要求1或2所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母工程菌以酿酒酵母BY4742为宿主细胞。
4.如权利要求3所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母工程菌还包括启动子,所述启动子为强化7‑脱氢胆固醇还原酶的表达;所述启动子为PGK1p、GPM1p、TDH3p、TEF1p、TPI1p、GPD1p、TEF2p、ACT1p、GAL1p和TDH2p中的一种或多种。
5.权利要求1 4任一所述的酿酒酵母工程菌的构建方法,其特征在于,所述方法包括以~下步骤:
(1)表达盒的构建:将整合位点上游同源臂,酵母启动子,7‑脱氢胆固醇还原酶基因,酵母终止子,整合位点下游同源臂构建得到7‑脱氢胆固醇还原酶表达盒元件;将得到的7‑脱氢胆固醇还原酶表达盒元件以及含有Cas9蛋白的敲除质粒通过酵母转化的方式导入到酵母细胞体内,通过酵母自身的同源重组完成元件的组装进而得到完整的表达盒;
(2)将上述表达盒插入到酿酒酵母BY4742酵母染色体ChrXI上的1114a位点,并敲除C‑
22甾醇去饱和酶成功构建得到酿酒酵母工程菌。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述酵母启动子为PGK1p、GPM1p、TDH3p、TEF1p、TPI1p、GPD1p、TEF2p、ACT1p、GAL1p和TDH2p中的一种或多种。
7.如权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述酵母终止子为ADH1t。
8.一种生产菜油甾醇的方法,其特征在于,采用权利要求1 4任一所述的酿酒酵母工程~菌制备菜油甾醇。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,将酿酒酵母工程菌接种至种子培养基中,制备得到种子液;将种子液转接至发酵培养基中,收集培养后的细胞,加入皂化反应液,反应结束后加入正己烷萃取,制备得到菜油甾醇。
10.权利要求1 4任一所述的酿酒酵母工程菌在制备菜油甾醇及含有菜油甾醇的产品~中的应用。