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专利号: 202110088156X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-19
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种高产红没药烯的酿酒酵母工程菌,其特征在于所述酿酒酵母工程菌按如下方法构建:在增强甘油代谢途径的酿酒酵母菌中,转入红没药烯合成酶基因Agbis,同时敲除葡萄糖阻遏转录因子MIG1,构建得到高产红没药烯的酿酒酵母工程菌;

所述增强甘油代谢途径的酿酒酵母菌按如下步骤制备:第一步使用Gal10启动子高表达甘油转运通道基因PtFPS2;第二步用Gal1启动子高表达甘油脱氢酶基因Opgdh;第三步用Gal7启动子高表达二羟基丙酮激酶基因DAK1;第四步用Gal2启动子高表达NADH氧化酶基因NOXE。

2.如权利要求1所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于所述红没药烯合成酶基因Agbis核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示;所述葡萄糖阻遏转录因子MIG1核苷酸序列为SEQ ID NO.15所示。

3.如权利要求1所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于所述甘油转运通道基因PtFPS2核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示;所述甘油脱氢酶基因Opgdh核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示。

4.如权利要求1所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于所述NADH氧化酶基因NOXE核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示;所述二羟基丙酮激酶基因DAK1核苷酸序列为SEQ ID NO.7所示。

5.如权利要求1所述的酿酒酵母工程菌,其特征在于所述酿酒酵母菌为酿酒酵母菌株YS036。

6.一种权利要求1所述酿酒酵母工程菌产红没药烯的方法,其特征在于所述方法为:将权利要求1所述的酿酒酵母工程菌接种至甘油蔗糖合成最小培养基中,加入体积终浓度5‑

15%的十二烷,培养温度28‑32℃,转速180‑220rpm,摇瓶发酵培养OD600达到8‑10,培养物离心,取上清,分离提取,获得红没药烯;所述甘油蔗糖合成最小培养基质量终浓度组成:0.5‑

1.5%蔗糖,0.5‑1.5%甘油,0.17%酵母氮源,0.5%硫酸铵,微量营养素,溶剂为蒸馏水,pH 

5.0;其中微量营养素是指组氨酸、亮氨酸或尿嘧啶中的一种或多种,在培养基中的终浓度均为20mg/L。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于所述蔗糖和甘油在培养基中的质量添加量均为1%。

8.如权利要求6所述的方法,其特征在于所述酿酒酵母工程菌发酵前先在葡萄糖合成最小固体培养基上划线活化,30℃培养48h,取单菌落接种至葡萄糖合成最小培养基,培养温度30℃,转速200rpm,摇瓶培养过夜,作为种子液;取种子液以体积浓度1‑5%的接种量接种至甘油蔗糖合成最小培养基;

所述葡萄糖合成最小培养基质量终浓度组成:2%葡萄糖,0.17%酵母氮源,0.5%硫酸铵,微量营养素,溶剂为蒸馏水,pH 5.0;其中微量营养素是指组氨酸、亮氨酸或尿嘧啶中的一种或多种,在培养基中的终浓度均为20mg/L。