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专利号: 2020116013191
申请人: 南京理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.高产微生物油脂红酵母基因工程菌,其特征在于,以红酵母U13N3为出发菌株,其三酰甘油脂肪酶AOX2和ATG15功能同时缺失;所述的红酵母U13N3的保藏编号为CCTCC NO:M 

2019503。

2.根据权利要求1所述的高产微生物油脂红酵母基因工程菌的构建方法,其特征在于,具体步骤如下:

步骤1,合成能使红酵母U13N3的AOX2和ATG15基因功能同时缺失的序列片段,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;

步骤2,将上述序列依次通过限制性内切酶和T4 DNA连接酶的酶切和酶连作用与基础质粒NM1‑5S‑tRNA‑SgH连接组成含有gRNA功能的质粒;

步骤3,采用农杆菌转化法依次将含有Cas9酶的质粒NM9‑SpCas9‑NLS和步骤2构建的质粒转入出发菌株红酵母U13N3,然后在抗性固体培养基中挑选阳性克隆,获得成功转化的高产微生物油脂红酵母基因工程菌。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,所述的抗性固体培养基的组成为:100μg/mL潮霉素B,120μg/mL G418,甘油30g/L,KH2PO42g/L,酵母粉1.5g/L,MgSO4·7H2O 1.5g/L,(NH4)2SO4 1.2g/L,琼脂15g/L。

4.根据权利要求1所述的高产微生物油脂红酵母基因工程菌的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

将生长在抗性固体培养基上的红酵母工程菌单菌落接种到含有种子培养基的摇瓶中,

33~37℃振荡培养,然后接种至发酵培养基中,于33~37℃振荡发酵,在发酵培养的前48h维持发酵液pH在5.5~6.0,随后,调节并维持发酵液pH在3.8~4.2,直至发酵结束。

5.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于,振荡培养和振荡发酵的转速为200~

250rpm。

6.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于,接种量为5%~10%。

7.根据权利要求4所述的培养方法,其特征在于,发酵培养基的组成为:甘油30~100g/L,KH2PO4 2g/L,酵母粉1.5g/L,MgSO4·7H2O 1.5g/L,(NH4)2SO4 1.2g/L。