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专利号: 2020115743233
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述重组解脂耶氏酵母菌是在解脂耶氏酵母基因组中插入优化的α‑蛇麻烯合酶编码基因ACHS2和tHMGR编码基因后得到。

2.根据权利要求1所述的生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述重组解脂耶氏酵母菌是在解脂耶氏酵母基因组中插入优化的α‑蛇麻烯合酶酶编码基因ACHS2的表达盒和tHMGR编码基因表达盒后得到。

3.根据权利要求1所述的生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述优化的α‑蛇麻烯合酶编码基因如SEQ ID NO.1所示;所述tHMGR编码基因如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1所述的生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述解脂耶氏酵母为Yarrowia lipolytica Po1fΔku70。

5.根据权利要求2所述的生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述ACHS2表达盒的启动子优选为解脂耶氏酵母的PTEFin启动子、PTEF启动子或PEXP启动子;所述ACHS2终止子为解脂耶氏酵母的TXPR2T终止子、TCYC1t终止子或Tlip1t终止子。

6.根据权利要求2所述的生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌,其特征在于,所述tHMGR表达盒的启动子为解脂耶氏酵母的PTEFin启动子、PTEF启动子或PEXP启动子;所述tHMGR终止子为解脂耶氏酵母的TXPR2T终止子、TCYC1t终止子或Tlip1t终止子。

7.一种权利要求1所述生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法,其特征在在于,包括如下步骤:

(1)重组质粒PUC‑leu‑A08‑ACHS2的构建:重组质粒PUC‑Ieu‑A08‑ACHS2是以PUC‑leu为骨架,插入了Yarrowia lipolytica Polf‑Δku70中A08位点处上下游同源臂,在该上下游同源臂之间插入了ACHS2基因表达盒;

(2)重组质粒PUC‑HUH‑IntC‑tHMGR的构建:重组质粒PUC‑HUH‑IntC‑tHMGR是以PUC‑his‑ura‑hisG为骨架,插入了Yarrowia lipolytica Polf‑Δku70中IntC位点处上下游同源臂,在该上下游同源臂之间插入了tHMGR表达盒;

(3)将质粒PUC‑leu‑A08‑ACHS2导入Yarrowia lipolytica Polf‑Δku70中得到重组菌

1为生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌;质粒PUC‑HUH‑IntC‑tHMGR导入重组菌1,tHMGR表达盒整合至基因组IntC位点,得到重组菌2为高产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌。

8.一种权利要求1所述生产α‑蛇麻烯的重组解脂耶氏酵母菌在发酵生产α‑蛇麻烯的中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵条件为28‑30℃,200‑240rpm,发酵培养基中葡萄糖浓度为40‑80g/L。