1.一种GH16家族耐热葡聚糖酶突变体,其特征在于,以葡聚糖酶野生型的序列SEQ ID NO.4为基础,进行点突变得葡聚糖酶突变体E36R、D127K或E36R/D127K;当葡聚糖酶突变体为E36R时,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;当葡聚糖酶突变体为D127K时,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;当葡聚糖酶突变体为E36R/D127K时,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种核酸分子,其特征在于,编码权利要求1所述的葡聚糖酶突变体的核苷酸序列,当所述葡聚糖酶突变体为E36R时,其核苷酸序列如SEQ ID NO.5;编码葡聚糖酶突变体D127K的核苷酸序列如SEQ ID NO.6;编码葡聚糖酶突变体E36R/D127K的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
3.一种重组载体,其特征在于,含有权利要求2所述的编码葡聚糖酶突变体的核苷酸序列的载体;当所含序列为SEQ ID NO.5时,重组载体为pPIC9r‑E36R;当所含序列为SEQ ID NO.6时,重组载体为pPIC9r‑D127K;当所含序列为SEQ ID NO.7时,重组载体为pPIC9r‑E36R/D127K。
4.一种重组菌株,其特征在于,表达权利要求3所述重组载体的菌株;当重组载体为pPIC9r‑E36R时,重组菌株为GS115/E36R;当重组载体为pPIC9r‑D127K时,重组菌株为GS115/D127K;当重组载体为pPIC9r‑E36R/D127K时,重组菌株为GS115/E36R/D127K。
5.基于权利要求1所述的一种GH16家族耐热葡聚糖酶突变体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)采用over‑lap PCR的方法扩增高温葡聚糖酶突变体的序列片段;
2)将葡聚糖酶突变体序列片段克隆到表达载体pPIC9r的EcoR I和Not I限制性酶切位点之间,得重组载体;
3)将突变体重组载体转化毕赤酵母GS115,诱导表达,获得突变菌株;
4)培养重组菌株,诱导重组葡聚糖酶表达;
5)回收并纯化所表达的耐热葡聚糖酶突变体。
6.基于权利要求1所述的一种GH16家族耐热葡聚糖酶突变体在降解半纤维素上的应用。