1.一种纳米高分子-双酶复合物,其特征在于所述纳米高分子-双酶复合物按如下方法制备:以羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶为双酶,以聚丙烯酸为载体,以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺为交联剂,以磷酸盐缓冲液为反应介质,在20℃-40℃、180-220rpm摇床中混合搅拌10-60min,获得纳米高分子-双酶复合物;所述羰基还原酶来源于Saccharomyces cerevisiae CGMCC No.3361。
2.如权利要求1所述纳米高分子-双酶复合物,其特征在于所述羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶质量比为1:0.5-1;所述羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶总量与聚丙烯酸质量比为1:1-5;
羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶总量与1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺质量比为1:
10-20。
3.如权利要求1所述纳米高分子-双酶复合物,其特征在于所述纳米高分子-双酶复合物按如下方法制备:将聚丙烯酸溶液与羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶,在20℃-40℃、180-
220rpm摇床中混合搅拌10-60min,加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和10mM,pH
7.4磷酸盐缓冲液,在20℃-40℃、180-220rpm摇床中混合搅拌10-60min,加入10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液,采用25kDa透析膜透析,取截留液,获得纳米高分子-双酶复合物;所述聚丙烯酸溶液是将0.02g/mL聚丙烯酸水溶液与等体积10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液混合制成。
4.如权利要求1所述纳米高分子-双酶复合物,其特征在于所述纳米高分子-双酶复合物按如下方法制备:(1)将聚丙烯酸溶液与10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液混合,加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺,在20℃-40℃、180-220rpm摇床中混合搅拌10-60min,加入羰基还原酶的10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液,在20℃-40℃、180-220rpm摇床中混合搅拌1-6h,加入10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液,采用25kDa渗析膜渗析,取截留液,获得羰基还原酶-聚丙烯酸共轭物;所述羰基还原酶与聚丙烯酸质量比为1:2-5;所述羰基还原酶与1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺质量比为1:10-20;所述聚丙烯酸溶液是将0.02g/mL聚丙烯酸水溶液与等体积10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液混合制成;(2)将聚丙烯酸溶液与10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液混合,加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺,在20℃-40℃、180-220rpm摇床中混合搅拌10-60min,加入葡萄糖脱氢酶的10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液在20℃-40℃、
180-220rpm摇床中混合搅拌1-6h,加入10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液,采用25kDa渗析膜渗析,取截留液,获得葡萄糖脱氢酶-聚丙烯酸共轭物;所述葡萄糖脱氢酶与聚丙烯酸质量比为1:
2-6;所述葡萄糖脱氢酶与1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺质量比为1:10-20;所述聚丙烯酸溶液是将0.02g/mL聚丙烯酸水溶液与等体积10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液混合制成;(3)将羰基还原酶-聚丙烯酸共轭物、葡萄糖脱氢酶-聚丙烯酸共轭物与1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺混合,在20℃-40℃、180-220rpm摇床中混合搅拌10-60min,加入
10mM,pH 7.4磷酸盐缓冲液,采用25kDa渗析膜渗析,取截留液,获得纳米高分子-双酶复合物;所述羰基还原酶-聚丙烯酸共轭物与葡萄糖脱氢酶-聚丙烯酸共轭物体积比为1:0.5-
1.5;所述羰基还原酶-聚丙烯酸共轭物与葡萄糖脱氢酶-聚丙烯酸共轭物总质量与1-乙基-
3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺质量比为1:0.5-1。
5.一种权利要求1所述纳米高分子-双酶复合物在不对称还原2-氧代-4-苯基丁酸乙酯制备(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述的应用以2-氧代-4-苯基丁酸乙酯为底物,以pH 7.4、10mM磷酸缓冲盐溶液为反应介质,以d-葡萄糖为辅助底物,以NADP为辅酶,以纳米高分子-双酶复合物为催化剂构成转化体系,在20-45℃、50-250rpm条件下进行还原反应8~40h,反应液分离纯化,获得(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述底物加入终浓度为300~700mmol/L;所述d-葡萄糖加入终浓度为0.05-0.15M;所述NADP加入终浓度为0.03-0.07mM;所述催化剂加入终浓度为0.1-0.6mg/mL。
8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述反应介质为pH 7.4、10mM磷酸缓冲盐溶液与有机溶剂的混合;所述有机溶剂为正己烷、邻苯二甲酸二丁酯、苯、甲苯或正庚烷。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述pH 7.4、10mM磷酸缓冲盐溶液与有机溶剂体积比为1-5:3。
10.如权利要求8所述的应用,其特征在于当反应介质为pH 7.4、10mM磷酸缓冲盐溶液时,底物加入终浓度为485mmol/L;当反应介质为pH 7.4、10mM磷酸缓冲盐溶液与有机溶剂的混合时,底物加入终浓度为533mmol/L。