1.一种用于鉴定Cry1Ab基因的KASP标记引物,其特征在于,包括K2标记引物和K4标记引物;
所述K2标记引物包括用于检测转基因位点A的上游引物K2A‑F、用于检测转基因位点A的下游引物K2A‑R、用于检测非转基因位点G的上游引物K2G‑F、用于检测非转基因位点G的下游引物K2G‑R,所述上游引物K2A‑F具有SEQ ID NO.1所示的DNA序列,所述下游引物K2A‑R具有SEQ ID NO.2所示的DNA序列,所述上游引物K2G‑F具有SEQ ID NO.3所示的DNA序列,所述下游引物K2G‑R具有SEQ ID NO.4所示的DNA序列;
所述K4标记引物包括用于检测转基因位点C的上游引物K4C‑F、用于检测转基因位点C的下游引物K4C‑R、用于检测非转基因位点G的上游引物K4G‑F、用于检测非转基因位点G的下游引物K4G‑R,所述上游引物K4C‑F具有SEQ ID NO.5所示的DNA序列,所述下游引物K4C‑R具有SEQ ID NO.6所示的DNA序列,所述上游引物K4G‑F具有SEQ ID NO.7所示的DNA序列,所述下游引物K4G‑R具有SEQ ID NO.8所示的DNA序列;
所述K2A‑F和所述K4C‑F的5’端连接荧光标签序列;所述K2G‑F和所述K4G‑F的5’端连接另一荧光标签序列;所述荧光标签序列为FAM或HEX。
2.一种权利要求1所述用于鉴定Cry1Ab基因的KASP标记引物在抗虫回交转育群体的基因型鉴定中的应用。
3.一种试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的用于鉴定Cry1Ab基因的KASP标记引物和KASP反应混合液。
4.一种权利要求3所述的试剂盒在抗虫回交转育群体的基因型鉴定中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述应用的方法为:S1、将待测样品的DNA与试剂盒中的试剂置于微孔反应板中混合获得KASP反应体系;
S2、将所述KASP反应体系进行Touchdown PCR反应获得反应产物;
S3、根据反应产物中的分子标记,进行基因分型。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述S2中所述Touchdown PCR反应具体为:S2‑1、94℃预变性15分钟;
S2‑2、94℃变性20秒,65℃~57℃退火并延伸60秒;
S2‑3、将所述S2‑2中变性、退火步骤重复10个循环,每个循环退火及延伸的温度降低
0.8℃;
S2‑4、94℃变性20秒,57℃退火并延伸60秒;
S2‑5、将所述S2‑4中变性、退火步骤重复26个循环获得反应产物。