1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36863，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36863，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1‑2任一项所述突变体36863的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以上述对接蛋白中的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得对接蛋白组合突变体36863，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示为基础，设计定点突变引物，以携带纤维小体对接蛋白基因的pET28a(+)载体为模板，进行PCR，构建重组突变质粒，并将突变质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，挑选阳性克隆进行发酵，发酵结束后收集菌体，对菌体进行破碎，纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。

4.如权利要求3所述突变体36863的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，由对接蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，突变为对接蛋白组合突变体36863，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.如权利要求3所述突变体36863的制备方法，其特征在于，发酵结束后离心收集菌体，对菌体进行超声破碎，经亲和色谱纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。

6.如权利要求3所述突变体36863的制备方法，其特征在于，对接蛋白组合突变体36863的PCR扩增，将质粒分为AB段和BA段，AB段扩增引物为SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.12，BA段扩增引物为SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.10，使用所述扩增引物分别对AB段和BA段进行扩增。

7.如权利要求6所述突变体36863的制备方法，其特征在于，PCR反应体系：质粒DocA‑pET28a载体模板1 μL，正向突变引物F1/F2 2μL，反向突变引物R2/R1 2μL，2× Max Buffer25μL，dNTP 4 μL，DNA Polymerase 1 μL，ddH2O15 μL。

8.如权利要求6所述突变体36863的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，PCR反应条件：

95℃预变性3min；95℃ 15sec，60℃ 15sec，72℃ 3min，18个循环；补充延伸72℃ 

7min。

9.如权利要求6所述突变体36863的制备方法，其特征在于，PCR反应完成后，需要用Dnp I酶对PCR扩增产物中的原有模板进行消化，消化反应体系混匀后，将其于37℃条件下消化

2h。

10.如权利要求9所述突变体36863的制备方法，其特征在于，所述消化反应 体系：PCR扩增产物40μL，DnpI酶1μL。

11.如权利要求9所述突变体36863的制备方法，其特征在于，将消化产物进行DNA凝胶电泳检测，检测后分别将AB段与BA段利用胶回收试剂盒进行回收。

12.如权利要求11所述突变体36863的制备方法，其特征在于，将回收后的AB段与BA段利用Exnase II进行重组，反应产物为待转化载体，重组反应体系如下：ddH2O 10 μL，5× CE II Buffer 4 μL，AB段回收产物 2 μL，BA段回收产物 2 μL， Exnase II 2 μL。

13.如权利要求12所述突变体36863的制备方法，其特征在于，突变载体的转化，将上述‑1

待转化载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中，将转化子涂布于含有卡那霉素50μg·mL 的LB固体培养基上，37℃过夜培养后，挑取单菌落，并进行测序验证，筛选阳性突变体，获得重组大肠杆菌36863‑ BL21。

14.如权利要求13所述突变体36863的制备方法，其特征在于，突变体的表达、纯化，将上述验证正确的菌种接种于含有卡那霉素50μg·mL‑1的液体LB培养基中，37℃过夜培养，然后转接至液体LB培养基中37℃培养至OD600≈1时加入至终浓度为1 μm·mL‑1的IPTG，于

26℃、200rpm条件下诱导8 h，收集诱导后的菌体，然后将菌体利用2ⅹPBS缓冲液重悬，利用超声波破碎，10000 rpm离心10 min，离心后上清中的蛋白使用镍离子亲和柱纯化，并使用PBS‑EP+缓冲液透析除盐，获得纯化的纤维小体对接蛋白组合突变体36863。

15.权利要求1‑2任一项所述突变体36863在与黏连蛋白CohA在低钙离子浓度相互作用‑7 ‑3

构建蛋白复合体中的应用，所述低钙离子浓度为10  M ‑ 10 M。

‑7 ‑4

16.如权利要求15所述应用，其特征在于，所述低钙离子浓度为10  M ‑ 10 M。

‑7 ‑6

17.如权利要求16所述应用，其特征在于，所述低钙离子浓度为10  M ‑ 10 M。

18.如权利要求15所述应用，其特征在于，所述对接蛋白组合突变体36863与黏连蛋白CohA在细胞内相互作用构建蛋白复合体中的应用。