1.一种可视化成像检测基因毒素Colibactin荧光分子探针在制备可视化成像试剂中的应用,所述可视化成像试剂为大肠杆菌BL21的可视化成像试剂,所述分子探针具有如下化学结构式:
。
2.权利要求1所述应用,其特征是,所述荧光分子探针的制备方法包括以下步骤:(1)原料a:N‑Boc‑D‑天冬酰胺,原料b:(E)‑2‑(3‑(4‑氨基苯乙烯基)‑5,5‑二甲基环己‑
2‑烯‑1‑基)丙二腈,原料c:2‑(7‑氧化苯并三氮唑)‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸盐和催化量的4‑二甲氨基吡啶的 无水吡啶溶液在室温下搅拌6‑8小时,通过加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应混合物后用乙酸乙酯萃取,将合并的萃取液干燥并真空浓缩,得到粗品,纯化粗产物,得到中间体1:叔丁基(S,E)‑(3‑氰基‑1‑((4‑(2‑(3‑(二氰基亚甲基)‑5,5‑二甲基环己‑1‑烯‑1‑基)乙烯基)苯基)氨基)‑1‑氧丙烷‑2‑基)氨基甲酸酯;
(2)将中间体1溶于CH2Cl2和三氟乙酸中,室温搅拌0.5‑3 h,加水除去三氟乙酸, 用乙酸乙酯萃取,有机相再用大量水洗,将有机相减压旋蒸除去后通过SiO2硅胶柱纯化,提纯时间为1‑6小时,得到中间体2:(S,E)‑2‑氨基‑3‑氰基‑N‑(4‑(2‑(3‑(二氰基亚甲基)‑5,5‑二甲基环己‑1‑烯‑1‑基)乙烯基)苯基)丙酰胺;
(3)将中间体2、肉豆蔻酸和原料c在吡啶中的溶液在室温搅拌5‑7小时,停止反应后将反应液倒入大量饱和碳酸氢钠水溶液中有固体产生,抽滤后滤渣用乙酸乙酯溶解用Na2SO4干燥并真空浓缩,得到粗品,通过SiO2柱色谱纯化粗产物,得到中间体3:(S,E)‑N‑(3‑氰基‑
1‑((4‑(2‑(3‑(二氰基亚甲基)‑5,5‑二甲基环己‑1‑烯‑1‑基)乙烯基)苯基)氨基)‑1‑氧丙烷‑2‑基)十四烷酰胺;
(4)将中间体3溶于乙酸中,加入TiCl4和H2O,在室温下搅拌1‑3小时,通入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应混合物后用乙酸乙酯萃取,将合并的萃取液干燥并真空浓缩,得到粗品,纯化粗产物,得到荧光分子探针(S,E)‑N1‑(4‑(2‑(3‑(二氰基亚甲基)‑5,5‑二甲基环己‑1‑烯‑1‑基)乙烯基)苯基)‑2‑十四碳酰胺基琥珀酰胺;步骤(4)将中间体3溶于5 mL‑20 mL乙酸中,加入TiCl4和20 ‑200 H2O,其中中间体3与TiCl4的摩尔比值为1:3。
3.根据权利要求2所述应用,其特征在于,步骤(1)中原料a:原料b:原料c的摩尔比为:
2:(1 3):(1 6);所述催化量的4‑二甲氨基吡啶为10 mg‑200 mg。
~ ~
4.根据权利要求2所述应用,其特征在于,步骤(2)中CH2Cl2和三氟乙酸的体积比为1:(1‑2)。
5.根据权利要求2所述应用,其特征在于,步骤(3)中中间体2与肉豆蔻酸和原料c的摩尔比为:中间体2:肉豆蔻酸:原料c=1:(1 3):(1 6)。
~ ~