1.一种具有pH敏感性及抗癌活性纳米粒,其特征在于,其原料由按质量份计的下述组分组成:
活化剂为1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺;两者的质量比为5:1;
其制备方法包括以下步骤:
(1)肉桂醛衍生物的制备
取组方量的氨茴酰肼于三颈烧瓶1中,加入组方量的无水乙醇,使氨茴酰肼充分溶解,升温至70℃加入肉桂醛,并滴加组方量的冰乙酸,持续反应8h;反应结束后,45℃旋蒸除去无水乙醇,用适量二氯甲烷洗涤固体沉淀,然后抽滤分离,重复三次,烘干后得到黄色粉末,即为肉桂醛衍生物;
(2)BSA‑CAE NPs的制备
取组方量的BSA于三颈烧瓶2中,然后加入组方量的PBS缓冲溶液,将三颈烧瓶2放在超声波萃取器1中,开启超声波萃取器1,60W搅拌10min使蛋白质充分分散,然后向其中加入组方量的EDC,搅拌至溶解,然后活化15min;取三颈烧瓶3于恒温槽中,在三颈烧瓶2和三颈烧瓶3中间连接一个蠕动泵1;取0.0085‑0.03份(1)中的产物于三颈烧瓶4中,三颈烧瓶4放于超声波萃取器2中,加入无水乙醇,240W超声搅拌1min,使上述产物充分溶解,在三颈烧瓶3和三颈烧瓶4中间连接一个蠕动泵2;取组方量的NHS于烧杯中,加入10mL蒸馏水使其溶解;
调节蠕动泵1和蠕动泵2的流速分别为20mL/h和10mL/h,然后开动蠕动泵1和蠕动泵2,使三颈烧瓶2和三颈烧瓶4中的溶液缓慢滴加到三颈烧瓶3中,至三颈烧瓶2和三颈烧瓶4中的溶液全部泵入三颈烧瓶3后,关闭蠕动泵1和蠕动泵2,同时手动滴加备于烧杯中的NHS溶液于三颈烧瓶3中,恒温条件下持续搅拌2h,然后停止反应,将溶液于4000r/min下离心30min,分离上清液,将其冻干,得到BSA‑CAE NPs;
(3)具有pH敏感性及双重抗癌活性纳米粒的获得取步骤(2)制得的BSA‑CAE NPs 0.01‑0.05份,溶于蒸馏水中,加入组方量的阿霉素Dox,室温下搅拌24h,产物离心后,通过紫外分光光度法依据朗伯比尔定律检测沉淀中Dox的含量,上层清液经冷冻干燥得到负载Dox的具有pH敏感性及双重抗癌活性纳米粒BSA‑CAE‑Dox NPs。
2.权利要求1所述的pH敏感性及抗癌活性纳米粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)肉桂醛衍生物的制备
取组方量的氨茴酰肼于三颈烧瓶1中,加入组方量的无水乙醇,使氨茴酰肼充分溶解,升温至70℃加入肉桂醛,并滴加组方量的冰乙酸,持续反应8h;反应结束后,45℃旋蒸除去无水乙醇,用适量二氯甲烷洗涤固体沉淀,然后抽滤分离,重复三次,烘干后得到黄色粉末,即为肉桂醛衍生物;
(2)BSA‑CAE NPs的制备
取组方量的BSA于三颈烧瓶2中,然后加入组方量的PBS缓冲溶液,将三颈烧瓶2放在超声波萃取器1中,开启超声波萃取器1,60W搅拌10min使蛋白质充分分散,然后向其中加入组方量的EDC,搅拌至溶解,然后活化15min;取三颈烧瓶3于恒温槽中,在三颈烧瓶2和三颈烧瓶3中间连接一个蠕动泵1;取0.0085‑0.03份(1)中的产物于三颈烧瓶4中,三颈烧瓶4放于超声波萃取器2中,加入无水乙醇,240W超声搅拌1min,使上述产物充分溶解,在三颈烧瓶3和三颈烧瓶4中间连接一个蠕动泵2;取组方量的NHS于烧杯中,加入10mL蒸馏水使其溶解;
调节蠕动泵1和蠕动泵2的流速分别为20mL/h和10mL/h,然后开动蠕动泵1和蠕动泵2,使三颈烧瓶2和三颈烧瓶4中的溶液缓慢滴加到三颈烧瓶3中,至三颈烧瓶2和三颈烧瓶4中的溶液全部泵入三颈烧瓶3后,关闭蠕动泵1和蠕动泵2,同时手动滴加备于烧杯中的NHS溶液于三颈烧瓶3中,恒温条件下持续搅拌2h,然后停止反应,将溶液于4000r/min下离心30min,分离上清液,将其冻干,得到BSA‑CAE NPs;
(3)具有pH敏感性及双重抗癌活性纳米粒的获得取步骤(2)制得的BSA‑CAE NPs 0.01‑0.05份,溶于蒸馏水中,加入组方量的阿霉素Dox,室温下搅拌24h,产物离心后,通过紫外分光光度法依据朗伯比尔定律检测沉淀中Dox的含量,上层清液经冷冻干燥得到负载Dox的具有pH敏感性及双重抗癌活性纳米粒BSA‑CAE‑Dox NPs。
3.根据权利要求2所述的pH敏感性及抗癌活性纳米粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中PBS缓冲液和无水乙醇的体积比为6:1。
4.根据权利要求3所述的pH敏感性及抗癌活性纳米粒的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)加入BSA的质量与加入的步骤(1)制得的肉桂醛衍生物(CAE)的质量比为24:1。