1.一种普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架,其特征在于,每100ml的脊髓支架制备溶液中含有如下组分:普鲁兰多糖0.1 1g,2%醋酸溶液1 20ml,10%透明质酸溶液0.5 5ml,~ ~ ~微纤维0.05 0.5g,上述原料的混合液由5%氢氧化钠溶液中和后,水洗至中性。
~
2.根据权利要求1所述的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架,其特征在于,每
100ml的脊髓支架制备溶液中含有如下组分:普鲁兰多糖0.3 0.6g,2%醋酸溶液5 12ml,10%~ ~透明质酸溶液1 3ml,微纤维0.1 0.4g,上述原料的混合液由5%氢氧化钠溶液中和后,水洗~ ~至中性。
3.根据权利要求1或2所述的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架,其特征在于,每
100ml的脊髓支架制备溶液中含有如下组分:普鲁兰多糖0.45g,2%醋酸溶液8ml,10%透明质酸溶液2ml,微纤维0.2g,上述原料的混合液由5%氢氧化钠溶液中和后,水洗至中性。
4.根据权利要求1或2所述的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架,其特征在于,所述2%醋酸溶液由纯水中加入醋酸配制而成,所述醋酸和纯水的体积比为1:49;
所述10%透明质酸溶液由透明质酸和纯水配制而成,所述透明质酸和纯水的质量比为
1:9;
所述5%氢氧化钠溶液由氢氧化钠和纯水配制而成,所述氢氧化钠和纯水的质量比为1:
19。
5.根据权利要求1所述的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架,其特征在于,所述微纤维的制备方法包括如下三阶段:a、从茧制备脱胶纤维;
b、将脱胶纤维水解成微米级纤维,具体步骤为:
将氢氧化钠加入到蒸馏水中,当30% 40%的NaOH放热反应溶解时,加入干燥的脱胶纤维~并用刮刀搅拌,进行水解,所述氢氧化钠蒸馏水和脱胶纤维的重量比为1:2.5 3.5:0.15~ ~
0.25;
c、微纤维洗涤、中和和冻干成纤维粉末;具体步骤为:c-1、将8 10倍于蒸馏水体积的水加入到阶段b的反应混合物中,并以离心力2500~ ~
3000g、离心5 8min;
~
c-2、弃上清液,将纤维再悬浮于8 10倍于蒸馏水体积的水中,搅拌并离心;
~
c-3、重复5 8次步骤c-2,除去过量碱;
~
c-4、测量pH值,并使用盐酸调节pH值至7.0;
c-5、将中和的纤维溶液再次以3000-4000rpm离心5 20min并重悬于水中,重复3 5次,~ ~最后将纤维悬浮在PBS中并冻干,得到纤维粉末。
6.一种普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备普鲁兰多糖-醋酸溶液:取配方量的普鲁兰多糖溶解于2%醋酸溶液中,静置过夜使其完全溶解;
(2)称量配方量的10%透明质酸溶液,将10%透明质酸溶液缓慢倒入步骤(1)制备的普鲁兰多糖-醋酸溶液中,用玻璃棒搅拌至充分溶解;
(3)称量配方量的微纤维,加入到步骤(2)的混合液中,搅拌,使其充分溶解;
(4)用5ml注射器吸取步骤(3)中制备好的脊髓支架制备溶液,注射到分区式组织工程脊髓模具中,固定好PtTS模具,平放在玻璃大皿中,置于冰箱冷冻;
(5)取出步骤(4)冰箱内的PtTS模具,退去PtTS模具外层,将包裹内芯的PtTS轻轻放入含有5%氢氧化钠溶液的玻璃大皿中,中和,用纯水清洗至中性;
(6)用镊子把步骤(5)中清洗至中性的PtTS模具夹入冻干瓶中,盖好瓶塞,水平放入冰箱,冷冻;
(7)取出步骤(6)中冷冻后的冻干瓶,利用冷冻干燥机将冻干瓶完全冻干后,自冷冻干燥机上取下冻干瓶,并取出PtTS,小心退去PtTS的内芯,得到普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架;
(8)将步骤(7)中制备好的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架放入到密封袋中,标记好名称和制备时间,于阴凉、干燥处保存,使用前取出脊髓支架用Co60照射、消毒,备用。
7.根据权利要求6所述的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)′制备普鲁兰多糖-醋酸溶液:取0.45g普鲁兰多糖溶解于5ml的醋酸溶液中,静置过夜使其完全溶解;
(2)′称量2ml的10%透明质酸溶液,将10%透明质酸溶液缓慢倒入步骤(1)′制备的普鲁兰多糖-醋酸溶液中,用玻璃棒搅拌至充分溶解;
(3)′称量0.2g的微纤维,加入到步骤(2)′的混合液中,65℃超声搅拌2.5h,使其充分溶解;
(4)′用5ml注射器吸取步骤(3)′中制备好的0.8ml的脊髓支架制备溶液,注射到分区式组织工程脊髓模具中,固定好PtTS模具,平放在玻璃大皿中,置于冰箱-20℃,冷冻过夜;
(5)′取出步骤(4)′冰箱内的PtTS模具,退去PtTS模具外层,将包裹内芯的PtTS轻轻放入含有5%氢氧化钠溶液的玻璃大皿中,中和2h后,用纯水清洗15min,洗涤8次,至用pH试纸检测浸洗后的水为中性;
(6)′用镊子把步骤(5)′中清洗至中性的PtTS模具夹入冻干瓶中,盖好瓶塞,水平放入冰箱-20℃,冷冻2h后取出冻干瓶;
(7)′提前打开冷冻干燥机,待温度降至-40℃以下,真空降至0.02Pa时,将冻干瓶移接到冷冻干燥机上,并使其与真空泵连通起来,利用冷冻干燥机将冻干瓶冻干2h至完全冻干后,自冷冻干燥机上取下冻干瓶,并取出PtTS模具,小心退去PtTS的内芯,得到普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架;
(8)′将步骤(7)′中制备好的普鲁兰多糖-透明质酸-微纤维脊髓支架放入到密封袋中,标记好名称和制备时间,于阴凉、干燥处保存,使用前取出脊髓支架用Co60照射、消毒,备用。