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专利号: 2020103195596
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测多氯联苯的生物传感器的制备方法,其特征在于,包括纳米金溶液、发卡探针HAP1和HAP2、Walker、APT、血红素、钾离子、目标物和缓冲液;

HAP1碱基序列如SEQ No.1所示;具体为:5’‑AAAAAATTTTTTTTTTTTATTCTCCTTAAACATCCGTCGGAGAATGGGTAGGGCCGACGGATGTTTAAG‑3’;

HAP2碱基序列如SEQ No.2所示;具体为:5’‑ATCCGTCGGCCCTACCCATTCTCCGACGGATGTTTAAGGAGAATGGGTAGGGCGGGTTGGG‑3’;

Walker碱基序列如SEQ No.3所示;具体为:5’‑AAAAAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGACGGATGTTTAAGGAGAATGG‑3’;

APT碱基序列如SEQ No.4所示;具体为:5’‑CACTCGGACCCCATTCTCCTTCCATCCCTCATCCGTCCAC‑3’;

所述的目标物为多氯联苯;

所述的生物传感器的制备方法,包括以下步骤:

(1)制备纳米金溶液;

(2)拱形探针的构建;

(3)将拱形探针和发卡探针HAP1修饰到金纳米粒子表面,得到功能化的纳米金溶液;

(4)均相反应:将多氯联苯、发卡探针HAP2、血红素、钾离子和功能化的纳米金溶液加入到均相中,混和均匀后孵育;

(5)荧光仪检测化学发光;

所述的步骤(2)拱形探针的构建步骤如下:

将灭菌水、5×PBS、Walker和APT加入到预先准备好的灭菌的EP管中,震荡30s,在95℃下孵育5min,缓慢冷却至室温杂交为拱形探针,储存于‑20 ℃备用。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)中纳米金溶液的浓度为1 nM。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(3)拱形探针和HAP1修饰到金纳米粒子表面的操作步骤如下:①将拱形探针和HAP1混合,得到混合溶液Q;

②以3 μL/min的速度混合溶液Q加入到纳米金溶液中,搅拌均匀,4 ℃放置;

③以2 μL/min的速度将PB缓冲液加入到纳米金溶液中,搅拌均匀,10分钟后,以2 μL/min的速度将27 μL PBS缓冲液加入到纳米金溶液中,4 ℃放置;

④以2 μL/min的速度将PBS缓冲液加入到纳米金溶液中,搅拌均匀,4 ℃放置;

⑤加入灭菌水洗脱未标记上的DNA链,4 ℃保存备用。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(4)均相反应操作步骤如下:将发卡探针HAP2、血红素、缓冲液、功能化的纳米金溶液和多氯联苯加入离心管中,震荡30s,于37℃下水浴60 min。

5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述的步骤(5)荧光仪设置激发波长为350 nm,发射波长设置为420 nm,检测范围设置350 nm‑550 nm。

6.权利要求1的制备方法制备的生物传感器在检测多氯联苯上的应用。