1.一种半胱天冬酶生物传感器,其特征是,包括磁珠、检测探针、环形模板、DNA聚合酶、二级引物;所述磁珠表面包覆链霉亲和素;所述环形模板为环形单链DNA序列,所述二级引物为单链DNA序列;
所述检测探针包括连接的肽底物结构域和DNA引物结构域,所述肽底物结构域为氨基酸序列,所述DNA引物结构域为单链DNA序列;肽底物结构域含有特异位点,所述特异位点能够被半胱天冬酶识别并切割,所述特异位点与连接位点距离n个氨基酸,所述连接位点是肽底物结构域和DNA引物结构域的连接处,所述肽底物结构域连接生物素,特异位点位于生物素与连接位点之间,所述n为小于10的自然数;
所述DNA引物结构域能够与环形模板、DNA聚合酶、二级引物配合进行分支滚环扩增反应;
所述检测探针的序列为:Lys‑Ser‑His‑Ser‑His‑Gly‑Asp‑Thr‑Glu‑Ile‑Cys‑CAT TCG GTA GTA GGT TGT ATA GTT G;
所述环形模板的序列为:CAA CTA TAC AAC CTA CTA CCG AAT GAA TAT GAA CAC ATT CTA AGT CTC TAT GTC TGG CAA CAG TGT;
所述二级引物的序列为:CAT TCT AAG TCT CTA TGT CTG;
所述半胱天冬酶为半胱天冬酶‑8。
2.如权利要求1所述的半胱天冬酶生物传感器,其特征是,所述特异位点为天冬氨酸和甘氨酸之间的肽键。
3.如权利要求1所述的半胱天冬酶生物传感器,其特征是,n为5。
4.如权利要求1所述的半胱天冬酶生物传感器,其特征是,DNA聚合酶为phi29 DNA聚合酶。
5.一种权利要求1 4任一所述的半胱天冬酶生物传感器在制备检测半胱天冬酶‑8活性~药剂中的应用。
6.一种检测半胱天冬酶活性的试剂盒,其特征是,包括权利要求1 4任一所述的半胱天~冬酶生物传感器、缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸。
7.一种半胱天冬酶‑8活性的检测方法,其特征是,提供权利要求1 4任一所述的半胱天~冬酶生物传感器或权利要求6所述的试剂盒,通过链霉亲和素和生物素的相互作用使检测探针与磁珠连接,半胱天冬酶识别检测探针的特异位点并切割,释放DNA引物结构域,释放的DNA引物结构域与环形模板、DNA聚合酶、二级引物进行分支滚环扩增反应,然后添加荧光染料进行荧光检测;
所述的半胱天冬酶活性的检测方法以非疾病的诊断与治疗为目的。
8.如权利要求7所述的半胱天冬酶‑8活性的检测方法,其特征是,将磁珠与检测探针在室温下进行第一次孵育,然后洗涤去除未与磁珠连接的检测探针。
9.如权利要求7所述的半胱天冬酶‑8活性的检测方法,其特征是,荧光检测的激发波长为495nm。
10.如权利要求7所述的半胱天冬酶‑8活性的检测方法,其特征是,将半胱天冬酶添加至检测溶液中,所述检测溶液中含有连接检测探针的磁珠,在人体温度下进行第二次孵育,将孵育后中磁珠分离去除,获得清液,向清液中添加环形模板、二级引物、DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸进行第三次孵育,再向第三次孵育后的产物添加荧光染料,然后进行荧光检测;
第二次孵育的时间25 35min;
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向清液中添加环形模板、二级引物加热至90 100℃处理,冷却后加入DNA聚合酶、脱氧~核糖核苷三磷酸进行第三次孵育;
第三次孵育的温度为25 35℃,孵育时间为55 65min;
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第三次孵育后在64 66℃的温度条件下处理。
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11.一种权利要求1 4任一所述的半胱天冬酶生物传感器或权利要求6所述的检测半胱~天冬酶活性的试剂盒在筛选半胱天冬酶‑8抑制剂中的应用。
12.一种权利要求1 4任一所述的半胱天冬酶生物传感器在制备内源性半胱天冬酶‑8~蛋白酶活性检测药剂中的应用,所述特异位点能够被内源性半胱天冬酶‑8蛋白酶识别并切割。