利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020101079637
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种黑麦6RL染色体臂特异KASP分子标记,其特征在于,所述KASP分子标记为YTU6RL,其KASP分子标记YTU6RL的引物包括黑麦等位型上游引物YTU6RL-F、小麦等位型上游引物YTU6RL-H和共用下游引物YTU6RL-C;

所述黑麦等位型上游引物YTU6RL-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;

所述小麦等位型上游引物YTU6RL-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;

所述共用下游引物YTU6RL-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.一种权利要求1所述的黑麦6RL染色体臂特异KASP分子标记在小麦-黑麦种质资源创新和分子标记辅助选择育种中的应用。

3.一种权利要求1所述的黑麦6RL染色体臂特异KASP分子标记在鉴定小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦6RL染色体臂的应用。

4.一种鉴定小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦6RL染色体臂的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)提取待测样品的DNA,作为模板;

(2)利用所述KASP分子标记YTU6RL的引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物;

所述KASP分子标记YTU6RL的引物包括黑麦等位型上游引物YTU6RL-F、小麦等位型上游引物YTU6RL-H和共用下游引物YTU6RL-C;所述黑麦等位型上游引物YTU6RL-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述小麦等位型上游引物YTU6RL-H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述共用下游引物YTU6RL-C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;

(3)采用荧光定量PCR检测仪分析PCR扩增产物基因型;37℃测量荧光信号,Bio-Rad CFX Manager 3.1读取分型结果;分型结果中若等位型为Allele1/Allele1则为黑麦的基因型,若等位型为Allele1/Allele2则为小麦中携带黑麦6RL染色体臂的基因型,若等位型为Allele2/Allele2则为不含黑麦6RL染色体臂的小麦的基因型。

5.根据权利要求4所述的鉴定小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦6RL染色体臂的方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应体系为:10-30ng/μL DNA 3.0μL,2×KASP Maseter Mix 5.0μL,引物混合液 0.12μL,ddH2O 1.88μL,总体系为10.0μL;其引物混合液中所述黑麦等位型上游引物YTU6RL-F和小麦等位型上游引物YTU6RL-H的浓度均为12μM;共用下游引物YTU6RL-C的浓度为30 μM。

6.根据权利要求4或5所述的鉴定小麦-黑麦后代材料中是否携带黑麦6RL染色体臂的方法,其特征在于,所述PCR扩增的程序为:94℃预变性15分钟;94℃变性20秒, 64℃梯度退火并延伸60秒,10个循环,每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃;94℃变性20秒, 58℃退火并延伸60秒,38个循环。