1.一种黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记的引物,其特征在于,所述KASP分子标记为YTU4RS,KASP分子标记YTU4RS的引物包括黑麦等位型上游引物YTU4RS‑F、小麦等位型上游引物YTU4RS‑H和共用下游引物YTU4RS‑C;
所述黑麦等位型上游引物YTU4RS‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;
所述小麦等位型上游引物YTU4RS‑H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;
所述共用下游引物YTU4RS‑C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种权利要求1所述的黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记的引物在进行小麦‑黑麦染色体工程育种和分子标记辅助选择育种中的应用。
3.一种权利要求1所述的黑麦4RS染色体臂特异KASP分子标记的引物在鉴定小麦‑黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的应用。
4.一种小麦‑黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)提取待测样品的DNA,作为模板;
(2)利用所述KASP分子标记YTU4RS的引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物;
所述KASP分子标记YTU4RS的引物包括黑麦等位型上游引物YTU4RS‑F、小麦等位型上游引物YTU4RS‑H和共用下游引物YTU4RS‑C;所述黑麦等位型上游引物YTU4RS‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述小麦等位型上游引物YTU4RS‑H的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述共用下游引物YTU4RS‑C的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;
(3)采用荧光定量PCR检测仪分析PCR扩增产物基因型;37℃测量荧光信号,Bio‑Rad CFX Manager 3.1读取分型结果。
5.根据权利要求4所述的小麦‑黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的鉴定方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应体系为:20ng/μL DNA 6.0μL,2×KASP Maseter Mix
10.0μL,引物混合液0.24μL,ddH2O 3.76μL,总体系为20.0μL;其引物混合液中所述黑麦等位型上游引物YTU4RS‑F和小麦等位型上游引物YTU4RS‑H的浓度均为12μM;共用下游引物YTU4RS‑C的浓度为30μM。
6.根据权利要求4或5所述的小麦‑黑麦后代材料中是否携带黑麦4RS染色体臂的鉴定方法,其特征在于,所述PCR扩增的程序为:94℃预变性15分钟;94℃变性20秒, 64℃梯度退火并延伸60秒,10个循环,每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃;94℃变性20秒, 58℃退火并延伸60秒,38个循环。