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专利号: 2019114235503
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器的构建方法,其特征在于,在电极表面固载MB‑H1、Fc‑H2以及燃料链F*,驱动H1和H2进行等温催化发夹自组装,即可完成所述传感器的构建;

其中,所述F*以溶液形式滴加至电极表面,该溶液制备过程如下:先将底物链S*与纳米金修饰的磁性Fe3O4微球结合,并与单链I*互补杂交,再加入目标DNA为外引物F3的LAMP反应

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溶液,诱导I*转换为i‑motif结构,同时驱动Mg ‑DNAzyme组装和特异性剪切并释放F*,收集含有F*的上层溶液即可;

所述固载的具体方法是:在上述电极表面分别滴加MB‑H1和封闭剂HT,再滴加含F*的溶液和Fc‑H2即可;

2+

所述Mg ‑DNAzyme组装和特异性剪切反应的具体过程是:向上述溶液中加入催化链C*

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和Mg ,C*与S*杂交形成Mg ‑DNAzyme,同时底物链S*被Mg 特异性剪切为两段,其中远离纳米金修饰的磁性 Fe3O4 微球 靠近5’端的序列片段为F*。

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述LAMP反应溶液是利用5μL不同浓度的hDNA与2μL模板DNA、2μL外引物B3、各3μL的内引物BIP和FIP、1μL聚合酶Bst和1μLdNTPs于PCR仪中闭管反应而得。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,S*与纳米金修饰的磁性Fe3O4微球通过Au‑N键结合,反应时间为12小时,反应温度为室温;S*与I*互补杂交反应时间为1小时,反应温度为室温;LAMP反应溶液加入后的反应时间为1小时,反应温度为室温。

4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述电极为直径4mm的玻碳电极,并在其表面于HAuCl4溶液中进行恒电位电沉积金。

5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述MB‑H1、Fc‑H2的制备方法为:在发夹H1的3’端标记亚甲蓝MB,5’端修饰氨基‑NH2,即为MB‑H1;在H2的3’端标记二茂铁Fc,即为Fc‑H2;H1和H2有28个碱基互补。

6.利用权利要求1~5中任一项所述方法构建得到的一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器。

7.权利要求6所述电化学生物传感器在相关疾病标志物目标DNA定量检测中的应用。

8.一种消除LAMP背景干扰的比率型电化学生物传感器的定量检测方法,其特征在于,利用权利要求6所述传感器测定MB和Fc的电化学响应信号,从而实现对目标DNA的定量检测。