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专利号: 2019112357489
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种LAMP氢离子驱动i-motif变换比率型电化学传感器的构建方法,其特征在于,先将用不同电活性物质标记的两条DNA单链进行反应,然后将所得产物滴加至电极表面,最后在电极表面滴加LAMP反应溶液,即可完成所述传感器的构建;其中,LAMP反应溶液是通过以下方法制备得到的:利用hDNA与两条特殊的茎-环发夹DNA模板和前驱体进行扩增后,制备具有内引物结合位点的特殊双哑铃DNA结构,然后以该结构为起始模板,经LAMP扩增获得含大量副产物H+的LAMP反应溶液。

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述的两条DNA单链为S1和S2,它们分别用二茂铁Fc和亚甲蓝MB标记,得Fc-S1和MB-S2,即为电化学信号探针。

3.根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,Fc-S1和MB-S2的反应温度为室温,反应时间为2小时,所得产物滴加至电极表面并孵育16小时。

4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述内引物为BIP和FIP。

5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,LAMP扩增的反应条件为:在PCR仪中于

65℃闭管反应40分钟。

6.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,具体步骤如下:

(1)制备具有内引物BIP和FIP结合位点并能延伸的特殊双哑铃DNA结构;

(2)加入内引物BIP和FIP,该双哑铃DNA结构为起始模板,进行快速、简便、高效的延伸和扩增,得到含大量副产物H+的LAMP反应溶液;

(3)将两电化学信号探针Fc-S1和MB-S2在室温反应2小时后,滴加到电沉积金的玻碳电极表面;

(4)在上述电极表面滴加LAMP反应溶液。

7.根据权利要求6所述的构建方法,其特征在于,特殊双哑铃DNA结构的制备方法如下:目标物hDNA与两条特殊的茎-环发夹DNA模板HT和DNA前驱体HP、DNA聚合酶Bst以及dNTPs,在PCR仪中于50℃闭管反应20分钟,形成具有内引物BIP和FIP结合位点并能延伸的特殊双哑铃DNA结构。

8.利用权利要求1~7中任一项所述方法构建的一种LAMP氢离子驱动i-motif变换比率型电化学传感器。

9.权利要求8所述传感器在HIV标志物DNA定量检测中的应用。

10.一种LAMP氢离子驱动i-motif变换比率型定量检测方法,其特征在于,利用权利要求8所述传感器对所述两种电活性物质的电化学响应信号进行测定,从而实现对HIV标志物DNA的定量检测。