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专利号: 2019113097578
申请人: 南京泰奥德生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种全人源单克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述全人源单克隆抗体来源于全人源单克隆杂交瘤细胞株,所述杂交瘤细胞株由人骨髓瘤细胞株组合和人外周血B淋巴细胞融合得到;

其中,所述人骨髓瘤细胞株组合由人骨髓瘤细胞株RPMI 8226和K6H6/B5按照细胞数量比为2:1,利用pH 8.0 8.2的40%PEG 4000作为融合剂,在30℃水浴作用下处理45秒融合而~成;

所述杂交瘤细胞株的制备方法为将人骨髓瘤细胞株RPMI 8226和K6H6/B5用DMEM混合制成细胞悬液,与人外周血B淋巴细胞按细胞数量3:1混合,1000r/min离心10min,弃上清,使人骨髓瘤细胞和人B淋巴细胞充分混匀;在30℃水浴下,将1ml 的pH为8.0 8.2的40%~PEG4000加入融合管内,边加边轻轻搅动,静置60秒,然后立即在90秒内加入30ml DMEM,终止反应;37℃水浴10min,1000r/min离心10min,弃上清,将细胞沉淀以15%胎牛血清的HAT选择培养液悬起,铺入已加有饲养细胞的细胞板中,37℃,5%CO2培养箱培养,得到杂交瘤细胞株。

2.如权利要求1所述的全人源单克隆抗体的制备方法,其特征在于:将饱和硫酸铵溶液作为包被液对所述全人源单克隆抗体进行包被,利用EILSA法进行全人源单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选。

3.如权利要求1所述的全人源单克隆抗体的制备方法,其特征在于:包括,将阳性全人源单克隆抗体杂交瘤细胞株进行扩大培养,并沉淀浓缩全人源单克隆抗体,之后进行抗体纯化。

4.如权利要求3所述的全人源单克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述沉淀浓缩全人源单克隆抗体,为利用PEG6000沉淀蛋白后超速离心,获得高纯度高抗体滴度的全人源单克隆抗体。