利索能及
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专利号: 2019112105755
申请人: 怀化学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种果胶酶人工序列,其特征在于,所述序列与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的相似度≥90%。

2.如权利要求1所述的果胶酶人工序列,其特征在于,序列包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的果胶酶人工序列,其特征在于,序列为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

4.一种权利要求1-3任一所述的果胶酶人工序列的应用,其特征在于,所述应用为构建重组载体、表达盒或重组菌。

5.一种权利要求1-3任一所述的果胶酶人工序列的应用,其特征在于,所述SEQ ID NO.1所示的核苷酸编码的蛋白质用于果汁澄清。

6.一种果胶酶人工序列的表达方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一、将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列重组构建到pPICZα载体中,经转化到毕赤酵母宿主菌细胞中并用1000μg/mL Zeocin的YPD平板筛选得到高Zeocin抗性的转化子;

步骤二、所得的转化子用BMGY培养基培养至OD600为10~12,离心收集细胞沉淀,用BMMY培养基重悬细胞,加入甲醇并使其质量分数为1~2%,诱导1~3d,筛选高水平分泌表达果胶酶的转化子;

步骤三、高水平分泌表达果胶酶的转化子用BMGY大量生长培养,之后用BMMY培养基重悬细胞并在28℃继续诱导培养,补加甲醇使其质量分数保持在1~2%。

7.如权利要求6所述的果胶酶人工序列的表达方法,其特征在于,还包括步骤四,蛋白纯化:用DEAE离子交换柱对步骤三中BMMY培养基的上清液进行纯化,先用平衡缓冲液平衡层析柱,再将经过透析去除离子并调节pH的上清液过柱,用含30mM NaCl的pH 8.0缓冲液漂洗柱子,然后用含100mM NaCl的pH 6.0缓冲液溶液将目标蛋白洗脱下来即可。