利索能及
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专利号: 2019111973197
申请人: 怀化学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-04
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种重组果胶酶基因,其特征在于,所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种重组果胶酶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一、将SEQ ID NO.1所示核苷酸序列重组到构建到pET32载体中;再转化到大肠杆菌菌株中,得到表达株;

步骤二、表达株在LB液体培养基中培养,并加入0.1 0.5 mM的IPTG诱导,发酵完毕,超~

声破碎,离心取上清,得可溶性的重组果胶酶。

3.如权利要求2所述的重组果胶酶的制备方法,其特征在于,还包括步骤三、蛋白纯化:用镍亲合层析柱对步骤二得到的上清液进行纯化,先用平衡缓冲液平衡镍亲合层析柱,再将上清液过柱,用含pH 8.0含40 mM咪唑的10 mM Tris‑Hcl缓冲液漂洗柱子,然后用含200 mM咪唑的pH 8.0 10 mM Tris‑Hcl缓冲液将融合蛋白洗脱下来,洗脱的蛋白上样到pH 8.0含10 mM Tris‑Hcl缓冲液平衡的DEAE柱,经pH 8.0含20 mM NaCl的10 mM Tris‑Hcl缓冲液漂洗柱子后,用 pH 6.0含100 mM NaCl的10 mM PBS缓冲液洗脱,即得到高纯度的重组果胶酶。

4.一种如权利要求1所述重组果胶酶基因的用途,其特征在于,所述重组果胶酶基因用于构建重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.一种重组果胶酶的用途,其特征在于,所述重组果胶酶用于果胶水解;所述重组果胶酶由权利要求1所述的重组果胶酶基因编码所得。