利索能及
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专利号: 2019111973197
申请人: 怀化学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种重组果胶酶基因,其特征在于,所述基因与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有

90%以上同源性。

2.如权利要求1所述的重组果胶酶基因,其特征在于,所述基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的重组果胶酶基因,其特征在于,所述基因为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。

4.一种重组果胶酶基因的表达方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一、将SEQ ID NO.1所示核苷酸序列重组到构建到pET32载体中;再转化到大肠杆菌菌株中,得到表达株;

步骤二、表达株在LB液体培养基中培养,并加入0.1~0.5mM的IPTG诱导,发酵完毕,超声破碎,离心取上清,得可溶性的重组果胶酶。

5.如权利要求4所述的重组果胶酶基因的表达方法,其特征在于,还包括步骤三、蛋白纯化:用镍亲合层析柱对步骤2)得到的上清液进行纯化,先用平衡缓冲液平衡镍亲合层析柱,再将上清液过柱,用含pH 8.0含40mM咪唑的10mM Tris-Hcl缓冲液漂洗柱子,然后用含

200mM咪唑的pH 8.0 10mM Tris-Hcl缓冲液将融合蛋白洗脱下来,洗脱的蛋白上样到pH 

8.0含10mM Tris-Hcl缓冲液平衡的DEAE柱,经pH 8.0含20mM NaCl的10mM Tris-Hcl缓冲液漂洗柱子后,用pH 6.0含100mM NaCl的10mM PBS缓冲液洗脱,即得到高纯度的重组果胶酶。

6.一种权利要求4或5所述的重组果胶酶的用途,其特征在于,所述重组果胶酶用于构建重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

7.一种权利要求4或5所述的重组果胶酶的用途,其特征在于,所述重组果胶酶用于果胶水解。

8.如权利要求7所述的重组果胶酶的用途,其特征在于,所述重组果胶酶用于含果胶成分的水解。