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专利号: 201911192900X
申请人: 福建省农业科学院植物保护研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于LAMP可视化检测玫烟色棒束孢的引物,其特征在于,所述引物包括F3引物、B3引物、FIP引物和BIP引物;

所述F3引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;

所述B3引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;

所述FIP引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示;

所述BIP引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.一种利用权利要求1所述的引物可视化检测玫烟色棒束孢的方法,其特征在于,包括:提取样品的基因组DNA,以所述基因组DNA为模板,利用权利要求1所述的引物进行LAMP反应,得到LAMP产物;

当所述LAMP产物为绿色时,所述样品中含有玫烟色棒束孢;

当所述LAMP产物为橘黄色时,所述样品中不含有玫烟色棒束孢;

所述LAMP反应使用的体系中含有钙黄绿素和MnCl2。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述LAMP反应使用的体系,每25μl包括:浓度为5μM的F3引物1μl、浓度为5μM的B3引物1μl、浓度为10μM的FIP引物4μl、浓度为10μM的BIP引物4μl、10×Thermopol Buffer 2.5μl、浓度为10mM的dNPTs 1μl、浓度为0.8M的Betaine 5μl、浓度为10mM的MgSO4溶液1μl、浓度为50μM的钙黄绿素1μl、250μM的MnCl2溶液1μl、酶活为8U的Bst DNA聚合酶1μl、浓度为10ng/μl的样品基因组DNA2μl,ddH2O补足到25μl。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述钙黄绿素与MnCl2的体积比为1:5。

5.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于,所述LAMP反应的条件包括:将所述LAMP反应使用的体系95℃变性5min,立即插到冰上,再65℃保持40min,再80℃保持2min。

6.权利要求1所述的引物在可视化检测玫烟色棒束孢中的应用。