利索能及
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专利号: 2019110540850
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用叶绿体基因组大单拷贝区精准鉴别枫斗类石斛基源的方法,其特征在于:

包括以下步骤:

步骤1,DNA提取和测序,提取待测样本的总DNA,将得到的DNA样品进行高通量测序获取片段序列;

步骤2,叶绿体基因组拼接,将测序获得原始序列利用CLC Genomics Workbench 6.0.1软件进行修整,参数设为:error probability<0.05,将修整后的序列匹配到参考基因组上,测序深度大于80×的核苷酸位点用于提取consensus序列,从而获得各样本的叶绿体基因组序列;

步骤3,叶绿体基因组LSC序列获取及比对,从步骤2得到的待检样本叶绿体基因组序列中提取LSC序列,与标准参照个体的LSC序列和外类群物种的LSC序列进行多序列比对;

步骤4,聚类对比鉴定,对步骤3比对后获得的LSC序列矩阵进行手动校对,利用Gblocks v.0.91b软件,去除空缺和比对模糊区域,参数“allowed gap positions”设为“none”,其余参数设为默认值,然后利用MEGA 6.0软件对LSC序列矩阵构建NJ树,模型设为K2P距离模型,bootstrap循环设定为1000次;

步骤5,结果判定,构树完成后打开树文件,待检样本与其标准参照个体聚为一支,且支持率大于50%,枫斗类石斛中的各个物种均得以成功鉴定。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1中选择待测样本的叶片或茎尖提取总DNA。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤2中所述参考基因组为霍山石斛叶绿体基因组,GenBank登录号LC490207。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤3和步骤5中所述标准参照个体是在枫斗类石斛的每个种选择一株开过花,并经专家对其花部形态特征进行鉴定,能够保证其种质正确无误的个体。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述枫斗类石斛基源包括霍山石斛、广东石斛、细茎石斛、西畴石斛、梵净山石斛、重唇石斛、铁皮石斛、曲茎石斛、钩状石斛、齿瓣石斛、杯鞘石斛、大包鞘石斛、肿节石斛、晶帽石斛、玫瑰石斛、束花石斛、罗河石斛、串珠石斛、美花石斛、报春石斛、兜唇石斛、喇叭唇石斛、梳唇石斛。