1.一种基于Real-time ARMS-qPCR鉴定霍山石斛及其枫斗制品的引物组,其特征在于,包括两对预扩增引物和两对ARMS特异性引物,所述两对预扩增引物:第一对引物,其上下游引物序列如Seq ID NO.1和2所示,第二对引物,其上下游引物序列如Seq ID NO.3和4所示;
所述两对ARMS特异性引物:第一对引物,其上下游引物序列如Seq ID NO.5和6所示,第二对引物,其上下游引物序列如Seq ID NO.7和8所示。
2.一种利用权利要求1所述的引物组的基于Real-time ARMS-qPCR鉴定霍山石斛的鉴定方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)待检样品DNA的提取:液氮充分研磨待检样品,提取总DNA;
(2)预扩增:以上述DNA为模板,利用预扩增引物进行PCR扩增,获得预扩增DNA;
(3)Real-time ARMS-qPCR扩增:以预扩增DNA为模板,利用ARMS特异性引物进行Real-time ARMS-qPCR扩增,得到荧光扩增曲线及相应Ct值,并基于霍山石斛的特异性扩增进行鉴定。
3.根据权利要2所述的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)所述的PCR扩增反应体系为:总体积20 µL,包括:10 × PCR Buffer 2μL、dNTP 1.4 μL,Mg2+ 1.4 μL,预扩增上游引物和下游引物各2 μL,模板DNA 3 μL DNA,Taq DNA 聚合酶 0.2 μL,余量为ddH2O。
4.根据权利要2所述的鉴定方法,其特征在于,步骤(2)所述的PCR扩增反应条件为:94℃预变性 4 min;94℃变性30s,55℃或47 ℃退火30 s,72 ℃延伸5 min,共35个循环后72 ℃延伸5 min,最后4 ℃保存。
5.根据权利要求2所述的鉴定方法,其特征在于,步骤(3)所述的Real-time ARMS-qPCR扩增反应体系为:总体积20 µL,包括:预扩增DNA 3 µL,ARMS特异性上游引物和下游引物各
2 µL,SYBR Green Mix TaqⅡ10µL,余量为ddH2O。
6.根据权利要2所述的鉴定方法,其特征在于,步骤(3)所述的Real-time ARMS-qPCR扩增反应体系为:94 ℃预变性 4 min; 94 ℃变性 30 s,53 ℃或55 ℃退火 30 s,72 ℃延伸 5 min,共 35个循环后 72 ℃延伸 5 min, 最后4 ℃保存。
7.根据权利要2所述的鉴定方法,其特征在于,所述霍山石斛还包括霍山石斛的枫斗制品。