1.一种无忧花无菌苗的诱导培养基,其特征在于,所述培养基包含水解酪蛋白和抗氧化剂。
2.根据权利要求1的诱导培养基,其特征在于,所述抗氧化剂为聚乙烯吡咯烷酮和/或改性活性炭。
3.根据权利要求2的诱导培养基,其特征在于,所述改性活性炭的改性方法为:将核桃壳和龙眼壳按照质量比为1:2混合,进行粉碎后过100目筛,然后浸渍于1-2mol/L的盐酸溶液或1-2mol/L的磷酸溶液中1-2h,过滤后放在明火中烘烤,直至把粉末烤黑,冷却后用1-
2mol/L的氢氧化钠溶液中和洗去酸液,再采用清水漂洗后干燥得到所述改性活性炭。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的诱导培养基,其特征在于,所述诱导培养基包括用于幼胚的诱导培养基I和用于从胚上分离的幼嫩茎段的诱导培养基Ⅱ。
5.根据权利要求4所述的诱导培养基,其特征在于,所述诱导培养基I的含量如下:1/
2MS0+IAA 0.5-1.0mg/L+GA3 0.5-3.0mg/L+水解酪蛋白500mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.5-
1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.0-7.0g/L,pH5.8-6.2。
6.根据权利要求4所述的诱导培养基,其特征在于,所述诱导培养基Ⅱ的含量如下:MS+
6-BA 0.5-3.0mg/L+NAA 0.2-1.0mg/L+水解酪蛋白500mg/L+改性活性炭1000mg/L+蔗糖
30g/L,琼脂粉6.0-7.0g/L,pH 5.8-6.2。
7.一种应用权利要求1-6任意一项诱导培养基进行无忧花无菌诱导方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:(1)果荚的采集和处理:在种子完全成熟前,约6月中下旬,采摘未开裂、饱满、无病虫害的中国无忧花果荚;
(2)低温处理:将步骤(1)中获得的果荚放置于5℃冰箱内冷藏4-7d,备用;
(3)种子的消毒:剥开果荚,选取颗粒光滑、相对饱满的种子,在超净工作台上,用消毒液对种子进行消毒处理;
(4)胚的剥离:在超净工作台上,用无菌手术刀片沿着种子表面的两片子叶的连接处轻轻插入,并将种子分为两部分,优选受损伤较小、外观较为完整的胚,将暴露的胚用消毒过的镊子轻轻转入诱导培养基I中;
(5)胚的萌发:将步骤(4)中完成接种的培养基置于培养室中进行培养,前两周用黑布覆盖进行暗培养,两周后去掉黑布,可观察到胚膨大,4周后可观察到胚芽端明显伸长;培养温度为25±2℃,光照强度800-1500lx,每天光照12-14h;
(6)无菌苗的获得:接种4周后,胚芽端伸长达到1-3cm,在超净工作台上将幼嫩的茎段从膨大的胚上分离,去除基部褐色组织,转入诱导培养基Ⅱ中,培养4-6周后可获得长势良好的无菌苗,可用于后期的种苗扩繁和生根等操作,培养室的培养程序、温度、光照强度和光照时间与步骤(5)相同。
8.根据权利要求7所述诱导培养基进行无忧花无菌诱导方法,其特征在于,所述步骤(3)的消毒液消毒处理方法为:将种子浸泡在消毒液Ⅰ中15-20min;取出后放入消毒液Ⅱ中浸泡30s;取出后用无菌水冲洗3-5次。
9.根据权利要求8所述诱导培养基进行无忧花无菌诱导方法,其特征在于,所述消毒液A为质量百分数为0.1%的HgCl2和0.01%的吐温-80溶液混合液;消毒液B为体积百分数为
75%的乙醇溶液。