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专利号: 2019108870316
申请人: 济南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测谷胱甘肽的生物传感器,其特征在于,包括纳米金溶液、发卡探针HAP、复合探针P、P3探针、血红素、钾离子、谷胱甘肽和缓冲液;

所述的复合探针P由P0探针、P1探针与P2探针通过碱基互补配对结合形成;

Walker探针是发夹探针HAP的部分序列;

所述的HAP序列如SEQ No.1所示;所述的HAP序列中,3’端第六个碱基和第七个碱基间修饰S‑S键;

所述的Walker序列如SEQ No.2所示;

所述的P0序列如SEQ No.3所示;

所述的P1序列如SEQ No.4所示;

所述的P2序列如SEQ No.5所示;

所述的P3序列如SEQ No.6所示。

2.一种权利要求1所述的检测谷胱甘肽的生物传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)制备纳米金溶液;

(2)复合探针P的构建;

(3)将复合探针P修饰到金纳米粒子表面,得到修饰后的纳米金溶液AuNPs‑P;

+

(4)均相反应:将谷胱甘肽、发卡探针HAP、P3探针、血红素、钾离子K 和修饰好的纳米金溶液AuNPs‑P加入到均相中,混合均匀后孵育;

(5)荧光仪检测化学发光强度。

3.根据权利要求2所述的检测谷胱甘肽的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述的步骤(1)中纳米金溶液的浓度为1 nM。

4.根据权利要求2所述的检测谷胱甘肽的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述的步骤(2)复合探针P的构建操作步骤如下:将灭菌水、10×PBS、P0探针、P1探针与P2探针加入到预先准备好的灭菌的EP管中,震荡

30s,在95℃下孵育5min,缓慢冷却至室温杂交为探针,储存于‑20 ℃备用。

5.根据权利要求2所述的检测谷胱甘肽的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述的步骤(3)复合探针P修饰到金纳米粒子表面的操作步骤如下:a 按照2.5μL/min的速度加入P复合探针,搅拌均匀,4 ℃放置48 h;

b 按照1μL/min的速度加入50 μL PB缓冲液,搅拌均匀,1μL/min的速度加入27 μL PBS缓冲液,4 ℃放置48 h;

c 按照1μL/min的速度加入62μL PBS缓冲液,搅拌均匀,4 ℃放置;

d 加入灭菌水洗脱未标记上的DNA链,4 ℃保存待用。

6.根据权利要求2所述的检测谷胱甘肽的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述的步骤(4)均相反应操作步骤如下:将发卡探针HAP、P3探针、血红素、3μL离子、缓冲液、AuNPs‑P和3 μL谷胱甘肽加入离心管中,震荡30s,于37℃下水浴60 min。

7.根据权利要求2所述的检测谷胱甘肽的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述的步骤(5)荧光仪设置激发波长为350 nm。