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专利号: 2019108413880
申请人: 齐鲁工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-09-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)制备检测线包被空肠弯曲杆菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条;

(2)在试纸条检测区域下方放置磁铁;

(3)金磁纳米颗粒的制备及修饰:制备Fe3O4@AuNPs纳米颗粒并在其表面修饰空肠弯曲杆菌抗体;

(4)脂质体的制备:采用反相蒸发法制备包埋L‑半胱氨酸的生物素化的脂质体;

(5)将样品溶液与Fe3O4@AuNPs溶液、亲和素溶液和脂质体充分混合,室温下反应,然后滴加到试纸条层析,样品在毛细作用下在试纸条上流动,当移动到结合垫时,基于抗原抗体间的免疫反应,修饰抗体脂质体‑Fe3O4@AuNPs将与样品中含有的空肠弯曲杆菌结合,形成脂质体‑Fe3O4@AuNPs‑抗体‑目标菌复合物,加入Triton X‑100破坏脂质体结构,使其空腔中负载的L‑半胱氨酸释放出来,然后加入金纳米颗粒,在L‑半胱氨酸存在的条件下,金纳米颗粒结合在一起,产生聚集,导致试纸条检测线出产生的红色颜色信号增强,最终,试纸条得以检测出样品中低浓度的空肠弯曲杆菌。

2.根据权利要求1所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,所述的磁铁的磁场强度在20mT‑500mT。

3.根据权利要求1所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸,所述样品垫、磁性纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上,所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线;所述检测线包被空肠弯曲杆菌抗体;所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体。

4.根据权利要求3所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,试纸条的制备方法包括以下步骤:(1)金磁纳米颗粒的制备:合成磁性纳米颗粒Fe3O4,在其表面包被一层金,得到Fe3O4@AuNPs纳米颗粒;Fe3O4@AuNPs表面修饰空肠弯曲杆菌抗体;

(2)样品富集预处理:将修饰空肠弯曲杆菌抗体的Fe3O4@AuNPs纳米颗粒溶液加入到样品溶液中充分反应,富集样品中存在的空肠弯曲杆菌,然后在外加磁场条件下,分离出结合空肠弯曲杆菌的免疫磁性纳米颗粒,重新溶解在PBS溶液中;

(3)硝基纤维膜的处理:将空肠弯曲杆菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线,将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线,烘干,即得到处理后的硝基纤维膜;

(4)试纸条的组装:在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜,再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸,组装后裁剪为60mm长,3.8mm宽的试纸条,即得到所述检测空肠弯曲杆菌的免疫层析试纸条,将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。

5.根据权利要求3所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,试纸条的制备方法包括以下步骤:(1)金磁纳米颗粒的制备:合成磁性纳米颗粒Fe3O4,在其表面包被金壳,得到Fe3O4@AuNPs纳米颗粒,在Fe3O4@AuNPs表面修饰空肠弯曲杆菌抗体;

(2)脂质体的制备:采用反相蒸发法制备包埋L‑半胱氨酸的生物素化的脂质体;脂质体直径为150‑500nm;

(3)硝基纤维膜的处理:将空肠弯曲杆菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线,将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线,烘干,即得到处理后的硝基纤维膜;

(4)试纸条的组装:在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜,再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸,组装后裁剪为60mm长,3.8mm宽的试纸条,即得到所述检测空肠弯曲杆菌的免疫层析试纸条,将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。

6.根据权利要求1所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,试纸条还包括模纳米颗粒标记物结合垫上修饰有空肠弯曲杆菌抗体的金磁纳米颗粒Fe3O4@AuNPs。

7.根据权利要求1所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,金磁纳米颗粒Fe3O4@AuNPs直径在20‑500nm。

8.根据权利要求7所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸,所述样品垫、磁性纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线;所述检测线包被空肠弯曲杆菌抗体;所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体;所述磁性纳米颗粒标记物结合垫有修饰空肠弯曲杆菌抗体的金磁纳米颗粒Fe3O4@AuNPs。

9.根据权利要求7或8所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,试纸条的制备方法包括以下步骤:(1)金磁纳米颗粒的制备:合成磁性纳米颗粒Fe3O4,在其表面包被一层金,得到Fe3O4@AuNPs纳米颗粒,在Fe3O4@AuNPs表面修饰空肠弯曲杆菌抗体;

(2)结合垫的处理:将修饰空肠弯曲杆菌抗体的Fe3O4@AuNPs纳米颗粒溶液喷于结合垫上,得到处理后的标记物结合垫;

(3)硝基纤维膜的处理:将空肠弯曲杆菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线,将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线,烘干,即得到处理后的硝基纤维膜;

(4)试纸条的组装:在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜,再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸,组装后裁剪为60mm长,3.8mm宽的试纸条,即得到所述检测空肠弯曲杆菌的免疫层析试纸条,将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。

10.根据权利要求1‑8之一所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法,其特征在于,空肠弯曲杆菌为单克隆抗体或多克隆抗体。