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专利号: 2018105376067
申请人: 湖北工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种表达红曲霉菌Mn‑SOD的大肠杆菌工程菌株的构建及表达方法,其特征在于:该构建方法将红曲霉Mn‑SOD歧化酶基因导入到大肠杆菌中实现表达,具体包括如下步骤:(1)查找NCBI数据库,进行Block对比、引物分析,筛选并设计出红曲霉菌基因组Mn‑SOD的简并引物, 所述简并引物序列分别见SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2;

所述红曲霉菌为红色红曲霉Monascus rubber,已于2013年3月13日保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为:CCTCC NO:M2013082;

(2)从红曲霉菌获得Mn‑SOD酶基因的全长cDNA,然后在简并引物的引导下PCR扩增红曲霉菌,得到部分Mn‑SOD基因;

(3)通过红曲霉菌Mn‑SOD基因设计扩增引物,扩增得到完整红曲霉菌Mn‑SOD基因;用PCR方法扩增Mn‑SOD基因,经EcoRI和Hind III酶切点酶切后重组至相同酶切的表达质粒pET21a上,构建成pET21a‑SOD;用相同的方法构建pET28a‑MnSOD;

所述扩增引物序列分别见SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4;

所述红曲霉菌的Mn‑SOD基因序列见SEQ ID NO:5及推断的氨基酸序列见SEQ ID NO:6;

(4)将步骤(3)构建的重组质粒pET21a‑SOD、pET28a‑MnSOD表达载体分别导入大肠杆菌BL21细胞,并在IPTG诱导下表达得到有活性的Mn‑SOD,采用邻苯三酚自氧化法测定Mn‑SOD活性。