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专利号: 2019108384820
申请人: 上海应用技术大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:

1)制备包括核酸适配体的检测试剂,并对牛奶样品进行预处理;

2)绘制不同浓度的环丙氨嗪标准液与对应的拉曼强度的标准曲线;

3)将检测试剂加入至预处理后的牛奶样品中,反应后测定拉曼强度,并利用标准曲线得到牛奶样品中环丙氨嗪的含量数据;

步骤1)中,所述的检测试剂包括核酸适配体溶液、硝酸银溶液及硼氢化钠溶液;

步骤3)中,将检测试剂加入至预处理后的牛奶样品中的过程为:

3‑1)向预处理后的牛奶样品中加入核酸适配体溶液,并在25‑35℃下孵育15‑25min,得到混合液A;

3‑2)向步骤3‑1)中的混合液A中加入硝酸银溶液,并在‑5℃至5℃下孵育3‑8min,得到混合液B;

3‑3)向步骤3‑2)中的混合液B中加入硼氢化钠溶液,并在20‑30℃下反应7‑15min。

2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,所述的核酸适配体溶液中,核酸适配体序列为5’‑CCCGGTTGGTTGGTTGGTTTTCCC‑3’。

3.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,所述的核酸适配体溶液的浓度为70‑2000nmol/L,所述的硝酸银溶液的浓度为0.08‑

0.12mmol/L,所述的硼氢化钠溶液的浓度为0.08‑0.12mmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,所述的预处理过程为:向牛奶样品中加入三氯乙酸,静置后离心,取上清液,并调节上清液的pH值为4.5‑6。

5.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,步骤2)中,所述的标准曲线的绘制过程为:

2‑1)将不同浓度的环丙氨嗪标准液分别加入至多个容器中;

2‑2)分别向步骤2‑1)中的多个容器中加入核酸适配体溶液,并在25‑35℃下孵育15‑

25min;

2‑3)分别向步骤2‑2)中的多个容器中加入硝酸银溶液,并在‑5℃至5℃下孵育3‑8min;

2‑4)分别向步骤2‑3)中的多个容器中加入硼氢化钠溶液,并在20‑30℃下反应7‑

15min;

2‑5)测定步骤2‑4)中的多个容器中溶液的拉曼强度,绘制出不同浓度的环丙氨嗪标准液与对应的拉曼强度的标准曲线。

6.根据权利要求5所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,步骤2‑5)中,所述的拉曼强度的测定方法为:取容器中的溶液置于硅片上,利用拉曼光谱仪测定硅片上溶液的拉曼强度。

7.根据权利要求6所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,所述的拉曼光谱仪的激发波长为530‑535nm。

8.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体检测牛奶中环丙氨嗪的方法,其特征在于,步骤3)中,所述的牛奶样品中的环丙氨嗪含量为0‑0.5ppm。