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专利号: 2019109344587
申请人: 上海应用技术大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,该检测方法用于检测待测液中是否含有三聚氰胺或环丙氨嗪,并获得待测液中环丙氨嗪的含量,其特征在于,所述的检测方法包括以下步骤:

1)将待测液加入至纳米金检测液中,判断纳米金检测液是否变色;

若纳米金检测液变色,则待测液中含有三聚氰胺或环丙氨嗪中的至少一种,并进行步骤2);

若纳米金检测液不变色,则待测液中既不含三聚氰胺,也不含环丙氨嗪,检测过程结束;

2)将待测液加入至核酸适配体修饰纳米金检测液中,判断核酸适配体修饰纳米金检测液是否变色;

若核酸适配体修饰纳米金检测液变色,则待测液中含有三聚氰胺,并进行步骤3);

若核酸适配体修饰纳米金检测液不变色,则待测液中不含有三聚氰胺,而含有环丙氨嗪,并进行步骤4);

3)将待测液加入至含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液中,判断含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液是否变色;

若含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液变色,则待测液中同时含有三聚氰胺及环丙氨嗪,并进行步骤4);

若含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液不变色,则待测液中只含有三聚氰胺,检测过程结束;

4)将待测液与含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液的混合液进行吸光度测试,并根据吸光度得到待测液中环丙氨嗪的含量。

2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤1)中,所述的待测液与纳米金检测液的体积比为1:(0.8-1.2)。

3.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤1)中,所述的纳米金检测液中,纳米金的粒径为15-30nm,纳米金的浓度为8-

12mg/mL,纳米金检测液的溶剂为水。

4.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤2)中,所述的待测液与核酸适配体修饰纳米金检测液的体积比为1:(0.8-

1.2)。

5.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤2)中,所述的核酸适配体修饰纳米金检测液的制备方法为:在浓度为8-12mg/mL的纳米金溶液中加入(0.5-1.5)×104nM的核酸适配体溶液,之后在水浴25-35℃条件下反应20-40min,即得到核酸适配体修饰纳米金检测液,其中,所述的核酸适配体溶液的加入量为4-6μL/3mL纳米金溶液。

6.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤3)中,所述的待测液与含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液的体积比为1:(0.8-1.2)。

7.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤3)中,所述的含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液的制备方法为:在浓度为

8-12mg/mL的纳米金溶液中加入(0.5-1.5)×104nM的核酸适配体溶液,并在水浴25-35℃条件下反应20-40min,这样可以让适配体更好的包裹纳米金同时本身不会失活;再加入(0.5-

1.5)×103nM的CTAB溶液,混合均匀后,即得到含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液,其中,所述的核酸适配体溶液的加入量为4-6μL/3mL纳米金溶液,所述的CTAB溶液的加入量为

2-4μL/3mL纳米金溶液。

8.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,步骤4)中,待测液中环丙氨嗪含量的检测方法包括以下步骤:

4-1)取多份含CTAB的核酸适配体修饰纳米金检测液,分别加入不同浓度的环丙氨嗪标准液,得到浓度分布在0.05-0.5ppm的环丙氨嗪标准溶液,之后反应10-20min;

4-2)用紫外分光光度计分别测定不同浓度的环丙氨嗪标准溶液在650nm及526nm处的吸光度A650及A526,并计算相应的峰值比值ΔA,即ΔA=A650/A526;

4-3)分别以环丙氨嗪标准溶液的浓度、ΔA为横纵坐标,绘制标准曲线;

4-4)采用紫外分光光度计测定混合液的吸光度,并根据标准曲线,得到待测液中的环丙氨嗪的含量。

9.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,若待测液为牛奶样品,则在检测前对待测液进行前处理,该前处理的方法如下:将

0.5-1.5%的三氯乙酸溶液与待测液以体积比(0.5-1.5):1混合并静置5-15min,再以8000-

12000r/min的转速离心8-15min,之后取上层清液,用1.5-2.5mol/L的NaOH溶液调节pH至

7.0-9.0,此时有较好的显色效果,之后开始进行检测。

10.根据权利要求1-9任一项所述的一种基于核酸适配体修饰纳米金的环丙氨嗪检测方法,其特征在于,所述的核酸适配体的序列为GGTTGGTTGGTTGGTT。